ASTM E2799-22. Determinación de la eficacia de desinfectantes frente a biopelículas de Pseudomonas aeruginosa usando el bioensayo MBEC (Standard test method for testing disinfectant efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC assay).
Ensayo no acreditado aún en nuestro laboratorio.
Las biopelículas bacterianas están constituidas por grupos de bacterias que viven en una comunidad autoorganizada adheridas a superficies, interfaces o entre sí, incrustadas en una matriz de sustancias poliméricas extracelulares de origen microbiano. Las bacterias de biopelículas son fenotípicamente diferentes de las células planctónicas suspendidas del mismo genotipo.
La norma ASTM E2799 describe el uso del ensayo MBEC (Concentración Mínima de Erradicación de Biopelículas) para evaluar la eficacia de un desinfectante contra biopelículas de Pseudomonas aeruginosa. El dispositivo de ensayo MBEC consta de una tapa de plástico con 96 cúpulas y una placa receptora con 96 pocillos individuales. La biopelícula se establece sobre las cúpulas y se transfiere a una placa receptora para realizar pruebas de eficacia desinfectante. Los pocillos de la placa receptora se llenan con controles de esterilidad, crecimiento y neutralización y con 8 concentraciones del desinfectante de prueba, las cuales deben ser diluciones seriadas con un factor de dilución de ½. Para cada concentración de desinfectante, se realizan 5 réplicas. Después de un tiempo de contacto específico, la tapa con las cúpulas con biofilm se coloca en una nueva placa receptora que contiene neutralizador. El dispositivo se coloca en un sonicador para eliminar la biopelícula y luego las muestras de cada pocillo se diluyen, se siembran en placas y se realiza el recuento de las células viables. La reducción logarítmica de células viables se calcula comparando la densidad (log UFC) obtenida de los pocillos con biopelículas tratadas y controles no tratados. Opcionalmente, se puede realizar una determinación cualitativa de MBEC agregando medio líquido a la placa de recuperación e incubándola durante 24 horas. Posteriormente, se analiza la turbidez de los diferentes pocillos de la placa receptora y se determina el MEBC, la concentración mínima de desinfectante que erradica el biofilm, determinada como la concentración más baja en la que no se observa crecimiento en la mayoría de los cinco pocillos.