Necrosis Nerviosa Viral (VNN: Viral Nervous Necrosis) - Betanodavirus : Diagnóstico molecular (RT-PCR)

Información 28-09-15.

 

El virus de la necrosis nerviosa viral (VNN: Viral Necervous Necrosis) es un virus con genoma de ARN que pertenece al género Betanodavirus, de la familia Nodaviridae, que incluye a virus que infectan a peces e insectos. Este virus causa la enfermedad, conocida como necrosis nerviosa viral (VNN: Viral Nervous Necrosis), también denominada encefalitis viral de peces o encefalopatía viral y retinopatía (VER: Viral Encephalopathy and Retinopathy), que afecta principalmente a larvas y alevines de especies marinas, entre las que se incluyen el mero, el bacalao y la lubina. Sin embargo, este virus se ha identificado en docenas de especies de peces diferentes en todo el mundo, tanto en poblaciones de especies de la industria de la acuicultura en granjas marinas, como en especies salvajes.

Es un virus esférico, con cápside icosaédrica, no envuelto y de unos 25-35 nm de diámetro, y dos moléculas de ARN ss+: ARN-1, que codifica una ARN-polimerasa, ARN dependiente (proteína A), y un ARN-2, que codifica la cápside, en forma de dos proteínas precursoras (proteína α que dará lugar a la proteína β de la cápside, y la proteína γ). Se conoce un ARN-3, que es solamente un transcrito subgenómico del ARN-1 que codifica la proteína B no estructral.  El virus  se encuentra principalmente en el citoplasma de las neuronas y en los espacios extracelulares adyacentes de los peces afectados por la enfermedad. En las células infectadas aparece vacuolización celular y degeneración neural, observada en el cerebro, la retina, la médula espinal y los ganglios nerviosos. Las células infectadas forman agregados focales en todas las regiones del cerebro, y en las capas nucleadas de la retina, y su citoplasma se encuentra repleto de inclusiones con membrana conteniendo partículas virales. Estas lesiones provocan una mortalidad elevada, principalmente en las larvas y en los alevines.

Existen cuatro genotipos principales, a los que ha agregado un posible quinto genotipo:

      • RGNNV (Red Spotted Grouper Nervous Necrosis virus – Virus de la necrosis nerviosa del mero manchado rojo).
      • BFNNV (Barfin Flounder Nervous Necrosis virus – virus de la necrosis nerviosa de la platija Barfin).
      • SJNNV (Stripped jack Nervous Necrosis virus – virus de la necrosis nerviosa del jack –comedor o jurel- rayado) (Caranx vinctus).
      • TPNNV (Tiger Puffer Nervous Necrosis virus – virus de la necrosis nerviosa del pez fugo).
      • TNV (Turbot Nodavirus – Nodavirus del rodaballo).

Este virus puede tener una transmisión vertical y una transmisión horizontal horizontal La transmisión vertical, es la más importante y tiene lugar a partir de las hembras reproductoras infectadas a las larvas a través del huevo y de los líquidos genitales. La transmisión horizontal se ha demostrado experimentalmente de varias formas: poniendo peces sanos en contacto con larvas infectadas; bañando alevines en agua contaminada con homogeneizados de tejidos de peces infectados con Nodavirus; añadiendo virus purificados a partir de peces enfermos u obtenidos a partir de cultivos celulares en células SSN-1. La infección horizontal experimental se ha podido demostrar con larvas y alevines de fletán, pero no con los adultos. Se ha sugerido que algunas especies pueden ser portadoras asintomáticas y que a partir de ellos podrían infectarse larvas o alevines. La infección asintomática se ha demostrado lubinas (Sea bass), tilapia de Mozambique (Oreochronus mossambicus), o en los meros (próximos a granjas marinas).

Los peces jóvenes, cuando se infectan, tienen anorexia, cambian su pigmentación, y muestran signos neurológicos manifestados por natación anormal, llegando a tener una mortalidad del 100%.

Estos virus, generalmente infecta el cerebro de los peces, los ojos y la médula espinal, aunque bajo condiciones de estrés, el virus también puede afectar a otros órganos tales como las gónadas y el tracto digestivo. Esta enfermedad afecta el tejido nervioso y provoca cambios en los peces infectados que incluyen signos clásicos de encefalopatía y retinopatía viral con un comportamiento natatorio anormal (natación rápida y no coordinada, o natación en espiral), vacuolización del sistema nervioso central y vejiga natatoria hinchada. Otros signos adicionales pueden incluir letargo, apatía y anorexia. En los estadios larvarios y juveniles de las especies afectadas, la necrosis nerviosa viral (VNN) puede tener una mortalidad del 100%. En los peces adultos portadores, la infección no provocar signos externos de la enfermedad.

Actualmente la infección por estos virus constituyen uno de los principales problema de la acuicultura, para la cría de varias especies de peces, que se describió primero con la cría de del fletán (Atlantic halibut, Hippoglossus hippoglossus), pero hoy día afecta a más de 30 especies de peces marinos diferentes pertenecientes a 10 familias como rodaballo (Scophthalmus maximus), la platija (Verasper moseri), el bacalao atlántico (Atlantic cod, Gadus morhua), o el bacalao del Pacífico (Pacific cod, Gadus macrocephalus).

Recientemente, esta patología se ha identificado en especies de agua dulce, como los guppies (Poecilia reticulata), y el esturión (Acipenser gueldestaedi).

Pruebas recomendadas para el diagnóstico:

 

La microscopía electrónica permite observar las partículas virales en el citoplasma de las neuronas y en los espacios extracelulares adyacentes, pero este es un método utilizado en investigación , pero que no puede aplicarse al diagnóstico habitual.

El cultivo del virus, mediante inoculación de homogeneizados de tejidos en una línea celular de peces (SSN-1) obtenida del pez cabeza de serpiente (Snake Head, Channa striatus) podría utilizarse en laboratorios especializados en Virología de peces, pero tiene el inconveniente que no permite la replicación de algunas cepas, como la obtenida del fletán (Atlantic halibut, Hippoglossus hippoglossus).

La detección de anticuerpos por métodos de ELISA (Enzyme Immunosorbent Assay), sólo tiene interés infección en hembras reproductoras, pero en estas también se puede detectar su ARN mediante métodos de diagnóstico molecular (RT-PCR).

El diagnóstico molecular mediante RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction), es el método mas recomendando actualmente.

Pruebas realizadas en IVAMI:

 

  • Diagnóstico molecular (RT-PCR: Reverse Transcripase Polymerase Chain Reaction), para detectar ARN de virus de la necrosis nerviosa viral (VNN).

Muestra recomendada:

 

  • Tejido cerebral (al menos medio cerebro) y un ojo de los peces afectados.
  • Los tejidos de órganos abdominales (ovario, conducto biliares, intestino, túmulos renales, …), pueden contener virus, pero no siempre (50% aproximadamente), por lo que son muestras menos recomendadas.
    • Pienso de peces (en caso de sospecha de infección por piensos).

Conservación y envío de la muestra:

  • Refrigerada (preferido) durante menos de 2 días (imprescindible para examen microscópico).
  • Congelada: más de 2 días (sólo para pruebas de diagnóstico molecular).

Plazo de entrega:

 

  • Diagnóstico molecular (RT-PCR): 24 a 48 horas.

Coste de la prueba: