Lawsonia intracellularis - Diagnóstico molecular (PCR).

Lawsonia intracellularis - Diagnóstico molecular (PCR)

 

Lawsonia intracellularis es una bacteria intracelular obligada altamente patógena, de  1,25 a 1,75 μm x 0,25 a 0,43 μm, sin frimbias o esporas, del género Lawsonia, familia Desulfovibrionaceae, causante de procesos intestinales como la enteritis proliferativa hemorrágica (EPH), la enteropatía proliferativa porciana (EPP) o hiperplasia intestinal adenomatosa, y la adenomatosis intestinal porcina (AI). Estos procesos pueden tener manifestaciones similares a los provocados por Serpulina hyodysenteriae, causante de la disentería porcina, o a los provocados por Salmonella spp.  Lawsonia intracellularis es un patógeno animal que afecta principalmente a cerdos, si bien puede afectar a otros mamíferos como caballos, perros, ratas, cobayas, conejos, hurones, y hámsteres, entre otros. Esta bacteria está ampliamente distribuida en países productores de ganado porcino.  En la cría del cerdo, supone un problema por la mortalidad que provoca, por reducir la eficiencia alimentaria, el coste de la medicación, y los cuidados adicionales que requieren los animales.

El ciclo vital de esta bacteria implica un hospedador donde se multiplica. Los animales, pueden infectarse con la bacteria a través de la ingestión de heces, en las que  puede sobrevivir al menos 14 días a temperatura ambiente y fómites contaminados. Una vez en el interior del hospedador, Lawsonia intracellularis invade las células epiteliales intestinales a través de una vacuola de entrada. En el interior de las células la vacuola se rompe y la bacteria se multiplica en el citoplasma. Las células epiteliales infectadas continúan realizando la mitosis, y transmiten la bacteria a las células hijas; ésta acaba por ser liberada al exterior a través de extrusiones citoplasmáticas de las células epiteliales y se deposita sobre las microvellosidades o entre las criptas. La infección se extiende a todo el íleon, el yeyuno distal, el ciego y el colon, causando hiperplasia de las células infectadas y dando lugar al proceso de patogénesis de la enfermedad. La eliminación de Lawsonia intracellularis con las heces de los animales infectados generalmente comienza a los 7 días postinfección y puede persistir durante al menos 10 semanas.

El periodo de incubación de Lawsonia intracellularis es de 7 a 14 días con aparición de las primeras lesiones. El pico de la enfermedad se presenta alrededor de los 21 días postinfección. La infección por Lawsonia intracellularis tiene dos formas de presentación: aguda o crónica. La forma aguda causa la enteropatía proliferativa hemorrágica (EPH), que se manifiesta por de palidez, debida a una anemia hemorrágica aguda, diarrea y hemorragia intestinal masiva que puede ser fatal. En los animales gestantes, la forma aguda puede provocar aborto. La forma crónica que afecta a animales jóvenes con diarrea sin presencia de sangre, causa la adenomatosis intestinal porcina (AI), la hiperplasia intestinal adenomatosa o la enteritis proliferativa porcina (EPP). Los signos y síntomas asociados a la forma crónica incluyen anorexia, disminución del crecimiento y diarrea. La enteritis proliferativa porcina (EPP), puede manifestar signos clínicos variables, como diarrea, pérdida constante de peso, o incluso no presentar signos. Los animales con clínica leve pueden recuperarse sin tratamiento. En la necropsia existen lesiones que no son patognomónicas como intestino dilatado, hemorragias presentes o ausentes, mucosa intestinal hipertrofiada con surcos transversales profundos, que en la histopatología se observan con criptas mucosas alargadas, agrandadas, recubiertas de células epiteliales hipertróficas. La proliferación celular epitelial genera un engrosamiento de la mucosa del íleon, yeyuno e intestino grueso, con hiperplasia de los enterocitos de las criptas con numerosas mitosis y ausencia o disminución de las células productoras de mucus. En el citoplasma apical de los enterocitos hipertróficos, con tinciones adecuadas pueden observarse bacterias intracelulares en forma de bacilos pequeños, curvados.  

Pruebas recomendadas para el diagnóstico:

 

Lawsonia intracellularis es una bacteria intracelular obligada que requiere utilizar cultivos celulares para su crecimiento in vitro, lo cual dificulta el diagnóstico. La observación microscópica requiere la fijación de las biopsias intestinales, y el uso de tinciones especiales como la tinción de plata de Warthin-Starry, que permite ver las bacterias curvadas en el interior del citoplasma apical de los enterocitos. Sin embargo, esta observación no confirma la existencia de Lawsonia intracellularis, ni permite diferenciar de Campylobacter, u otras bacterias curvadas.  Por estas razones, el diagnóstico se basa en la detección de anticuerpos, que tropieza con la dificultad de preparar antígeno debido a las características especiales de cultivo de esta bacteria, y en métodos de diagnóstico molecular (PCR).

Pruebas realizadas en IVAMI:

 

  • Diagnostico molecular (PCR), para detectar ADN de Lawsonia intracellularis.

Muestra recomendada:

 

  • Heces recientes.
  • Raspado o biopsia de mucosa intestinal.

 

Conservación y envío de la muestra:

 

  • Refrigerada (preferido) durante menos de 2 días.
  • Congelada: más de 2 días (sólo para pruebas de diagnóstico molecular).

 

Plazo de entrega:

 

  • Examen microscópico: 24 horas.
  • Diagnóstico molecular (PCR): 24 a 48 horas.

Coste de la prueba:  

 

           Consultar a ivami@ivami.com