Prueba de citotoxicidad in vitro. Norma UNE-EN ISO 10993-5:2009. Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 5: Ensayos de citotoxicidad in vitro.

Biological Evaluation of Medical Devices. Part 5: In vitro cytotoxicity test. Guideline UNE-EN ISO 10993-5:2009.

Esta norma describe el procedimiento para detector la citotoxicidad in vitro de dispositivos médicos. La prueba puede realizarse con un extracto del dispositivo o con el dispositivo integro; con un contacto directo del extracto líquido o del dispositivo con las células, o bien con una aplicación indirecta (difusión en agar); con la absorción del extracto o líquido a una matriz absorbente; o con un procedimiento de difusión en filtro. Los dispositivos deben estar estériles, o deben esterilizarse en el laboratorio según las directrices del fabricante, ya que deben ponerse en contacto con cultivos celulares estériles. Debe proporcionarse cuáles son las recomendaciones del fabricante para la solución de extracción en caso de que la prueba deba realizarse con un extracto del dispositivo, y las condiciones que puedan degradarlo para evitarse. Si existe alguna preferencia por el uso de alguna línea celular concreta, debe indicarse. Las células más habituales de uso disponibles son células Vero, células BHK-21, WI-38, 3TC, .... La prueba debe realizarse por triplicado, y debe incluir los controles positivos y negativos correspondientes. Las monocapas utilizadas se encontraran en un estado de confluencia parcial con unas 24 a 48 horas de cultivo y tras la exposición al dispositivo en cualquiera de sus formas, se seguirán durante 24, 48 y 72 horas. Para evaluar el efecto puede optarse por el método cualitativo (examen microscópico con una graduación de los efectos (0/1/2/3/4), indicando los grados 2 a 4, de citotoxicidad. Para el método cuantitativo, se calcula el índice de muerte celular o la reducción de la captación de rojo neutro, con un índice de muerte celular > 30%, indicando citotoxicidad.

This guideline describes the procedure for in vitro cytotoxicity test of medical devices. The test can be performed with the device or with an extract; with a direct contact between the device or the fluid extract with cells, or by the indirect contact (agar diffusion test) with the cells; with the extract adsorbed to a matrix and this matrix in contact with the cells; or by  diffusion of the extract through a filter membrane in contact with the cells. The devices must be sterile or must be sterilized in the laboratory following recommendations from the manufacturer because it must be in contact with sterile cell cultures. The customer must provide the recommendations for the extraction when test should be performed using an extract of the device and the conditions that can damage the device to avoid degradation. If there is any preference to use any special kind of cell line, it should be indicated. The most common used cells are Vero cells, BHK-21 cells, WI-38, 3TC, …. The test must be performed in triplicate and must include the adequate positive and negative controls. The cells monolayers will be partially confluent after 24 to 48 hours culture and after contact with the device or the extract, will be followed during 24, 48 and 72 hours. To evaluate the effect a qualitative method (microscopic exam with evaluation of the grade of the effect -0/1/2/3/4-,  grades 2 to 4 indicating cytotoxicity. For the quantitative method the cell death index or the decrease of neutral red capture will be calculated, an index of cell death >30% indicates cytotoxicity.          

Cantidad de muestra necesaria para las pruebas

Para dispositivos médicos que posean al menos una superficie plana, el ensayo puede realizarse por contacto directo. En esos casos son necesarias 6 unidades.

Para otros tipos de dispositivos, el volumen de líquido de extraído preparado con el producto sanitario (dispositivo médico) sometido a ensayo, para realizar las pruebas es de 6 mL.

Para calcular la cantidad de muestra necesaria para preparar ese volumen de extraído, siguiendo las directrices de la norma UNE-EN ISO 10993, se requieren las siguientes cantidades del producto sanitario:

  • Dispositivos médicos con superficies planas (guantes, láminas, tejido, etc.):
      • Superficie de un grosor < 0,5 mm, 6 cm2/mL.
      • Superficie de un grosor entre 0,5-1 mm: 3 cm2/mL.
      • Superficie de un grosor > 1 mm: 1,25 cm2/mL.
  • Dispositivos sólidos de forma irregular: 0,2 gramos/mL.
  • Dispositivos porosos irregulares: 0,1 gramos/mL.

Multiplique el tamaño de la superficie o el peso indicado, según corresponda, por el número total de mililitros indicado, y sabrá la cantidad en cm2 o gramos necesarios para el ensayo. 

Coste de las pruebas

Consultar a ivami@ivami.com

Sample needed for tests (general recommendations for all Biological evaluation test with  Medical Devices)

For those medical devices that had at least a flat non-rigid surface, that will be in contact with the skin (e. gr. gloves) the assay may be performed by direct contact without a previous extraction procedure. It is necessary to inform about the surface that will be in contact with the skin. In those cases 6 units are needed.

For other kind of devices, the volume of fluid extract obtained from the medical device under test, to perform the tests is 6 mL.

 

To calculate the sample quantity to obtain the volume of extract needed, according to guideline UNE-EN ISO 10993, the following amounts are needed:

  • Medical devices with flat surfaces (films, tissues, etc.):
    • Surfaces with thickness < 0.5 mm, 6 cm2/mL (e. gr. to obtain 6 mL, 36 cm2 will be needed).
    • Surfaces with thickness between 0.5 and 1 mm: 3 cm2/mL (e. gr. to obtain 6 mL, 18 cm2 will be needed).
    • Surfaces with thickness > 1 mm: 1.25 cm2/mL (e. gr. to obtain 6 mL,, 9 cm2 will be needed).
  • Solid devices with irregular shape: 0.2 grams/mL.
  • Solid porous irregular devices: 0.1 grams/mL.

Multiply the size of the surface or the weight, as correspond, by the number of total mL indicated, and you will know in square cm or grams needed for the assay. 

Formulary with the characteristics of the product

In case of test order, a submission formulary must be addressed with the sample including any data or characteristics (kind of material, composition, …) that should be included in the laboratory report. 

Time schedule for results    

Time required to perform the tests is about 15 days after the reception of the sample in our laboratory. If we have the results earlier we will let you know.

Price of the test

Consult to ivami@ivami.com