Salmonella enterica subsp. entericaCultivo; Diagnóstico molecular (PCR); tipado antigénico molecular O y H; Anticuerpos frente a antígenos O y H; Comparación molecular de cepas.

Información (23-11-14)
 

Salmonella spp., es un grupo de bacterias heterogéneas de la familia Enterobacteriaceae. Hasta hace unos años, se habían considerado muchísimas especies, debido a que cada serotipo se consideraba como una especie diferente. Actualmente, sólo se admiten dos especies, Salmonella entérica, con seis subespecies (enterica [I], salamae [II], arizonae [IIIa], diarizonae [IIIb], houtenae [IV], e indica [V]), y Salmonella bongori, con una única subespecie. Las subespecies de Salmonella enterica se dividen en unos 50 serogrupos, según las diferencias antigénicas en sus lipopolisacárico (antígenos O), de las que se conocen actualmente 46 variantes. Las diferencias en os antígenos flagelares de fase 1 y de fase 2, de los que se conocen 114 variantes, permiten diferenciar serotipos de Salmonella, cada uno con una fórmula antigénica que aparece reflejada en el esquema de White, Kauffmann y Le Minor (o Kauffmann-White), que permiten diferenciar más de 2.600 serotipos, de los que más de 1.500 pertenecen a Salmonella enterica subsp. enterica. La actualización de los serotipos corresponde al Centro de Referencia de la WHO en el Instituto Pasteur de París. La mayoría de los serotipos de Salmonella aislados de muestras humanas, o de animales de sangre caliente, pertenecen a Salmonella enterica subsp. enterica (I) de los siguientes serogrupos: A, B, C1, C2, D, E1, E2, E3 y E4. Para identificar los serogrupos y serotipos, se necesitan muchos sueros específicos para cada uno de los serogrupos, y sueros específicos para los antígenos flagelares de fase 1 y de fase 2. El tipado de estos antígenos mediante procedimientos de aglutinación con sueros monoespecóficos es el método de referencia (gold Standard), pero para realizarlo se requieren más de 250 sueros anti-O y anti-H. Sin embargo, este método es incapaz de tipar las cepas rugosas o mucoides. 

La clasificación de Salmonella más allá del nivel de subespecie, es importante en ocasiones para la investigación clínica y epidemiológica, para conocer la fuente de infección, al estar algunas de las serovars asociadas con hospedadores concretos o con regiones geográficas concretas. Además, también se relacionan con la gravedad de la enfermedad, y con la resistencia a los antimicrobianos.

Salmonella enterica subsp. enterica, es el grupo de mayor relevancia clínica, por su habitual asociación con personas y animales de sangre caliente.

Se han utilizado varios métodos como complemento de la Serología, para realizar el seguimiento epidemiológico de las cepas aisladas: la electrofoirresis de campos pulsados (Pulse-field gel electrophorsis), la electroforesis de enzimas (multilocus enzyme electrophoresis), el análisis de secuencias repetidas (Variable-number-tandem-repeat analysis), el tipado de secuencias de multilocus (Multilocus sequence typing), la secuenciación de secuencias palindrómicas repetidas (repetitive extragenic palindromic sequence based PCR), el ribotipado (ribotyping). Estos métodos permiten predecir un número limitados de serovars, pero su uso ha estado limitado por los requerimientos técnicos, y además pueden llevar a identificaciones erróneas de serovars.

Los genes responsables de la expresión de los antígenos O, como las transferasas de monosacáridos (sugar transferases), o los genes para la síntesis de los antígenos O (O-antigen flippase –wzx-, o polimerase –wzy-, situados en un regulón llamado conjunto rfp. La comparación de genes wzx y wzy se ha considerado de utilidad para el diseño de cebadores  específos de serogrupos. Los genes rensponsables de la síntesis de la flagelina flagelar fliC (fase 1 flagelina), y fljB (fase 2 flagelina), poseen extremos terminales conservados y son muy variables en la región central que codifica el antígeno.

Pruebas realizadas en IVAMI:

• Cultivo.
• Anticuerpos anti-Salmonella subsp. enterica serovars typhi, paratyphi A, paratyphi B,paratyphi C (antígenos O y H de cada especie) por aglutinación directa.
• PCR.
• Comparación molecular de cepas.
• Determinación del serogrupo O.
• Determinación del serotipo completo (serogrupo O, flagelar fase 1 y flagelar fase 2).

Muestras recomendadas:

• Cultico y/o PCR: muestra clínica de sangre, heces, …
• Determinación de anticuerpos: suero.
• Determinación del serogrupo y/o serotipo; comparación de cepas: cultivo con aislado de Salmonella enterica subsp. enterica obtenido de muestras de cualquier origen.

Conservación y envío de la muestra:

Refrigerada (preferido) durante menos de 2 días.

Plazo de entrega:

Identificación de serogrupo y/o de serotipo completo: máximo 5 días.
 
Coste de la prueba:  

Consultar a ivami@ivami.com

Servicio recogida de muestra (incluido sólo en España Península):

Solicitar envío de mensajero al teléfono 96-169 17 02.