Zika, Virus ..., (ZIKV: Zika virus) (Flavivirus, Flaviviridae) (Arbovirus) – Diagnóstico molecular por PCR en tiempo real (Real Time PCR) y por detección de anticuerpos (serología) específicos mediante pruebas de neutralización

 

Información (01-02-16)

 

El virus Zika (ZIKV) es un Arbovirus de la familia Flaviviridae (género Flavivirus), transmitido por mosquitos, causante de la fiebre Zika, un síndrome febril exantemático autolimitado, similar al dengue. Los signos y síntomas más frecuentes son: fiebre moderada, exantema maculopapular, artralgias, mialgias, cefaleas y conjuntivitis. Con menor frecuencia pueden manifestarse edemas, faringitis, tos y vómitos. Existen casos que se han acompañado de síndrome de Guillain-Barré y de hipoacusia. Actualmente, existen evidencias, que  se continúan investigando, que relacionan a este virus con el incremento de las tasas de incidencia de microcefalia en las regiones afectadas.

 

Este virus se describió inicialmente en Uganda en 1947, en un chimpancé mono rhesus centinela para detectar fiebre amarilla en el bosque Zika, detectándose después en varias especies de mosquitos Aedes spp. Pudo demostrarse su infectividad para ratones con el suero del mono centinela y la transmisión por mosquitos infectados a ratones de experimentación. Entre 1951 y 1981, se han señalado evidencias serológicas de la infección humana en varios países africanos (Uganda, Tanzania, Egipto, República centroafricana, Sierra Leona, Gabón, …), en algunas zonas de Asia (India, Malasia, Filipinas, Tailandia, Vietnam, Indonesia, …), donde se han dado brotes documentados. El hallazgo por primera vez en la Isla de Yap (2007), en la federación de estados de la micronesia, evidenció que podía encontrarse fuera de África y Asia. Se han producido brotes en varias zonas de la región (Polinesia francesa -2007-, Nueva Caledonia, Isla de Pascua, Islas Cook, Malasia peninsular y Borneo, Tailandia, Camboya, Indonesia, …), afectando a viajeros de la zona. Su reservorio se admite que son primates no humanos, entre los que se transmite por mosquitos de hábitos selváticos, no urbanos.

 

Los primeros casos de infección detectados en Brasil ocurrieron en 2015, y en enero 2016, según la PHO (Pan Asmerican Health Organization). La mayoría de los estados de Brasil han informado casos adquiridos localmente, estimándose que se han producido 1,5 millones de casos. Además, se han detectado casos autóctonos en Barbados, Colombia, Ecuador, El Salvador, Guatemala, Guayana, Guayana francesa, Haití, Honduras, Martinica, México, Panamá, Paraguay, Puerto Rico, San Martín, Guadalupe, Surinam, Venezuela y Bolivia.

 

Enfermedad por virus Zika

 

La infección por este virus suele cursar con sintomatología leve, o incluso con infección asintomática en el 75% de los casos. Su sintomatología puede confundirse con la causada por la infección con virus Dengue o virus Chinkungunya.

 

El periodo de incubación puede variar de 3 a 12 días, y la sintomatología se mantiene durante 2 a 7 días.

 

Los principales síntomas son:

 

    • Fiebre moderada, por encima de 37,2ºC.
    • Exantema maculopapular.
    • Artritis o artralgias transitorias, principalmente en articulaciones de manos y pies.
    • Hiperemia conjuntival.
    • Mialgias, cansancio, cefaleas.

Complicaciones de la infección por virus ZIKA

 

La infección por virus Zika en la mayoría de los casos es asintomática (75%). En un 25% de los casos la sintomatología es leve.

 

Sin embargo, existen casos de complicaciones. Estas complicaciones han sido:

 

Complicaciones neurológicas como síndrome de Guillen-Barré (SGB). Estas complicaciones se han relacionado con  la presencia de anticuerpos frente a este virus en pacientes con este síndrome, y por la asociación temporo-espacial con la incidencia de casos de SGB.

 

Alteraciones neurológicas en recién nacidos: incremento de incidencia de malformaciones del sistema nervioso central, que se han relacionado con la presencia de anticuerpos en madres.

 

Microcefalia: incremento de casos en regiones con brotes de infección por este virus. Existen investigaciones en curso, para establecer la relación entre la presencia del virus en líquido amniótico y las malformaciones congénitas y algunos casos de la presencia del virus en el feto o en recién nacidos a término.

 

Lesiones oculares maculares y calcificaciones cerebrales en recién nacidos con microcefalia e infección intrauterina por virus Zika.

 

Otros: meningitis, meningoencefalitis, o mielitis.

 

Mecanismo de transmisión - Artrópodos vectores

 

Varias especies de mosquitos Aedes: Aedes aegypti, Aedes albopictus (presente en varias regiones del Levante español, incluidas las Islas Baleares) y  Aedes polynesiensis. La presencia de la especie Aedes albopictus se ha constatado en 7 Comunidades Autónomas de nuestro país: Cataluña, Comunidad Valenciana, Murcia, Baleares, Andalucía, País Vasco, y Aragón.

 

No se ha demostrado aun su trasmisión por transfusiones, pero no puede descartarse que pueda darse.

 

También se podría transmitir por vía de contacto sexual, como se ha demostrado en un caso en EE.UU.

 

Riesgo de introducción de virus Zika en España

 

Esta enfermedad no ha sido conocida previamente en España y la Unión Europea, y existe dificultad para su diagnóstico porque en la mayoría de los casos (75%) la infección es asintomática. Además, la sintomatología es similar a la desencadenada por otras infecciones por Arbovirus como la infección por virus Dengue o virus Chikungunya, entre otros, que también cursan con fiebre, de mayor o menos intensidad, y exantema. Por ello, existe el riesgo por los viajeros procedentes de áreas donde actualmente existe incidencia de casos (varios países de América latina,  entre ellos Brasil, Haití, etc.- y del Sudeste Asiático –Tailandia, Polinesia,- …), y que en nuestro país pueden desplazarse a regiones donde está presente la especie de mosquito Aedes albopictus, constituyen un riesgo para establecer un foco. Debe considerarse que la costa mediterránea, donde está presente el vector, es uno de los destinos preferentes para extranjeros procedentes de países donde existen brotes.

 

Riesgo de transmisión de virus Zika en España

 

El riesgo de transmisión depende de los siguientes factores:

 

    1. Presencia del vector. Existe en varias zonas del Levante peninsular e Islas Baleares.
    2. Introducción del virus por un viajero infectado procedente de áreas endémicas. Ello es factible, debido a la escasa o nula sintomatología que provoca en la mayoría de los infectados.
    3. Presencia de población susceptible en España.
    4. Coincidencia en el espacio y en el tiempo de un caso importado, en zonas donde existan mosquitos transmisores, hecho posible ya que los individuos infectados pueden desplazarse al Levante español.
    5. Posibilidad de que el virus encuentre las condiciones favorables para su transmisión.

Todas estas circunstancias pueden encontrarse en las zonas geográficas donde el vector está presente, especialmente durante los meses de mayo a octubre, por lo que existe un riesgo real de que pueda darse un foco de infección por virus Zika, en nuestro país.

 

Diagnóstico de las infecciones por virus Zika

 

El diagnóstico de la infección por virus Zika, puede realizarse por:

 

    • Aislamiento del virus en cultivo celular (sólo durante la primera semana después del contacto)..
    • Detección molecular por RT-PCR o por PCR en tiempo real (sólo durante la primera semana después del contacto)..
    • Detección de anticuerpos a partir del 3º ó 5º día de la aparición de los síntomas. Se han utilizado varios métodos como ELISA o inmunofluorescencia indirecta. Estos métodos tienen el problema de las reacciones cruzadas existentes de los anticuerpos generados por otros virus causantes de sintomatología similar, como ocurre con otros Flavivirus (Dengue, Chikungunya), por lo que para obviar este problema, y poder detectar anticuerpos específicos de virus Zika, es necesario realizar el método de neutralización. En IVAMI, disponemos de este método para detectar anticuerpos específicos de este virus.

Nota: para excluir el contacto, en ausencia de síntomas, se recomienda realizar la prueba de detección de anticuerpos específicos transcurridos al menos 15 días desde el posible contagio. En estos casos no se recomienda, ni la prueba de aislamiento del virus, ni la prueba de detección molecular por RT-PCR o PCR en tiempo real.

 

Pruebas realizadas en IVAMI:

 

    • PCR en tiempo real (Real-Time PCR), con cebadores (primers) y sonda específicos de Zika vrus. Esta prueba sólo está indicada en los primeros días (hasta unos 10 días) tras la infección, que es cuando la persona infectada puede tener el virus en sangre.
    • Anticuerpos específicos de virus Zika, por neutralización viral. Este método no presenta reacción cruzada con los anticuerpos debidos a otras infecciones por Arbovirus con sintomatología semejante, como ocurre en las infecciones por virus Dengue o virus Chikungunya. Esta prueba no está indicada en los primeros días tras la infección porque aun no ha dado tiempo a que se formen anticuerpos frente al virus. Esta prueba está indicada después de haberse infectado y haber transcurrido un tiempo (lo recomendable al menos 2 a 3 semanas) para que haya dado tiempo a que se formen anticuerpos. Esta prueba puede ser útil cuando se ha infectado por el virus (por ejemplo tras picaduras de mosquitos transmisores), aunque no se hayan tenido síntomas, porque el sistema inmunitario  reconoce el virus y genera anticuerpos frente a él.

Límite de detección del método de PCR en tiempo real:

           

    • 50 copias/mL

Tipos de muestras:

 

    • Pruebas de PCR en tiempo real: sangre periférica o plasma, en muestra de la fase aguda, y tomada dentro de los 10 primeros días de la enfermedad.
    • Pruebas de anticuerpos: muestra de suero separado de la sangre obtenida a partir del 5º ó 7º día del comienzo de la sintomatología clínica, o después de 15 días del posible contagio. Si no ha tenido sintomatología y la prueba se realiza únicamente como control para saber si ha sido infectado, le recomendamos esperar 3 semanas antes de la extracción de la sangre. La extracción de la muestra de sangre y la separación del suero de la sangre, se puede realizar en un laboratorio de análisis clínicos, debiendo depositar el suero (mínimo 1 mL) en un vial estéril y éste a su vez dentro de otro tubo para protegerlo durante el transporte.

Conservación y envío de la muestra:

           

    • Sangre completa o suero separado de la sangre: refrigerada (preferido) durante menos de 2 días (caja de corcho blanco con pack -frigolín- congelado). Mientras no se realiza el envío la muestra debe conservarse en nevera.
    • Congelada (sólo para muestra de suero separado de la sangre): si se va a conservar más de 2 días antes del envío.

 Plazo de entrega de resultados:

 

    • PCR en tiempo real: 24 a 48 horas.
    • Anticuerpos neutralizantes específicos de virus Zika: 7 a 15 días laborables.

 

 Coste de las pruebas

             Consultar a ivami@ivami.com