Prueba de Ecotoxicidad con Aliivibrio (Vibrio) fischeri (UNE 77104: 2014)

 

La Norma UNE 77104:2014 establece un método de ensayo para determinar la ecotoxicidad de un producto, mediante el análisis de la toxicidad aguda con bacterias bioluminiscentes de la especie Aliivibrio (Vibrio) fischeri. Esta norma se aplica a todos los productos utilizables en el medio marino para luchar contra las contaminaciones accidentales por hidrocarburos, incluyendo dispersantes, absorbentes y agentes de biorremediación. Para llevar a cabo el ensayo de toxicidad con absorbentes es necesaria una fase previa de lixiviación.

En este método se determina la toxicidad aguda de un producto mediante el estudio de la inhibición de la fluorescencia de Aliivibrio (Vibrio) fischeri debida a la exposición al producto de ensayo durante 30 minutos. Para ello se mide la bioluminiscencia inicial de las suspensiones de bacterianas de Vibrio fischeri depositadas en viales, y a continuación, se añaden a estos viales las diferentes soluciones del producto sometido a evaluación o de las soluciones control, según corresponda. Los viales se incuban a 15°C ± 1°C durante 30 minutos. Transcurrido el periodo de exposición, se mide la bioluminiscencia final de cada vial y se evalúa la disminución de la bioluminiscencia durante la exposición. Para evaluar la toxicidad se determina la concentración efectiva media (CE50), es decir la concentración del producto evaluado que reduce la luminiscencia en un 50 %. En este ensayo se deben emplear 3 viales con suspensiones bacterianas para cada concentración de producto evaluado, y el mismo número de viales de un control negativo, y de un producto tóxico de referencia. Las soluciones del producto evaluado deben prepararse por diluciones sucesivas a partir de la solución madre, que según las norma deben ser 10 concentraciones.

El resultado del bioensayo de toxicidad para dispersantes y agentes de biorremediación se considera negativo (no ecotóxico) cuando la CE50 del producto a los 30 minutos es superior a 100 mg/L, mientras que en caso contrario se considera positivo (ecotóxico). El resultado del bioensayo de toxicidad para absorbentes se considera negativo (no ecotóxico) cuando la CE50 del lixiviado a los 30 minutos es superior a 1.000 mg/L, mientras que en caso contrario se considera positivo (ecotóxico).