Instituto Valenciano de Microbiología
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Prueba de toxicidad dérmica aguda por el procedimiento de dosis fija (Acute dermal toxicity - OECD 402: 2017); EPA (Environmental Protection Agency) OPPTS 870.1200:1998 (Office of Prevention, Pesticides and Toxic Substances, USA). 

Prueba con el Certificado de Buenas Prácticas de Laboratorio (BPLs). 

Esta prueba proporciona información sobre los riesgos para la salud de la exposición a corto plazo a un producto químico de prueba por vía dérmica. La finalidad del procedimiento OECD 402 es proporcionar información sobre las propiedades peligrosas del producto a ensayar y permitir la clasificación de la sustancia en función de su toxicidad aguda según el Sistema Globalmente Armonizado de clasificación y etiquetado de productos químicos (GHS, por su acrónimo en inglés).

Los animales de preferencia para este estudio son adultos jóvenes de ratas hembra. El producto de ensayo se aplica a la piel de animales de experimentación del mismo sexo, empleando una dosis por grupo, constituido por un animal en el ensayo preliminar, y dos animales en el estudio principal. Para determinar la toxicidad dérmica aguda de un producto, los animales se exponen al producto de ensayo durante 24 horas en un procedimiento por etapas, donde dependiendo de los resultados se suministrarán diferentes dosis (50 mg/kg, 200 mg/kg, 1000 mg/kg y 2000 mg/kg) y son observados durante al menos 14 días.

Para minimizar el uso de animales y optimizar el diseño del experimento, se realiza un estudio previo para determinar la concentración inicial a emplear en el estudio principal. Cuando no exista información sobre el producto a testar o esta sea insuficiente, se recomienda empezar con una dosis inicial de 200 mg/kg. Si existe información previa del producto químico, se pueden seleccionar otras dosis iniciales (50 mg/kg, 1.000 mg/kg o 2.000 mg/kg). Para el estudio preliminar se dosifica un animal por dosis de ensayo con la dosis inicial (200 mg/kg u otra). Según los resultados obtenidos, se inocularán grupos de un animal con una dosis inferior o superior, hasta seleccionar la concentración que se espera que produzca signos claros de toxicidad sin causar efectos tóxicos graves o mortalidad. Si la dosis más baja causa toxicidad, la sustancia será directamente clasificada como categoría 1 de GHS. En caso contrario, se debe realizar el estudio principal con dos animales más para confirmar el resultado obtenido.

Para el estudio principal se dosifican dos animales con la dosis obtenida por el estudio preliminar. Según los resultados obtenidos, se podrán dosificar dosis menores o mayores (50 mg/kg, 200 mg/kg, 1000 mg/kg y 2000 mg/kg) en grupos de otros dos animales. El proceso de ensayo continua hasta que se identifica la dosis que causa toxicidad o no más de una muerte en el grupo de animales ensayado, cuando no se observan efectos con la concentración más alta, o cuando se producen muertes con la concentración más baja, hechos que permiten clasificar los productos dentro de las categorías GHS 1, 2, 3, 4, 5 o no clasificado.

En ambos estudios, los animales son observados tras la aplicación del producto, intermitentemente durante las 24 horas de exposición. Posteriormente, el producto es eliminado, y los animales son observados diariamente hasta que transcurren al menos los 14 días de observación obligatorios. Sin embargo, la duración de la observación no es fija, sino que debe determinarse por la naturaleza y el tiempo de aparición de los signos clínicos y la duración del período de recuperación. Se deberá mantener un periodo mínimo de 48 horas entre las pruebas con diferentes niveles de dosis, hasta comprobar la supervivencia de los animales previamente expuestos al producto. Además de la categoría GHS, debe informarse de cualquier alteración observada en los animales y su comportamiento. Los animales que mueren o son sacrificados durante el estudio, y los animales supervivientes que son sacrificados al final del estudio, se someten a una necropsia general y se informa de todas las alteraciones macroscópicas observadas, que en caso de considerarse necesario puede completarse con observaciones microscópicas.

Las sustancias problema deben mantenerse en contacto con la piel con un apósito de gasa porosa y una cinta no irritante durante un período de exposición de 24 horas. Cuando se analizan sólidos, que pueden pulverizarse si procede, la sustancia problema debe humedecerse lo suficiente, preferiblemente con agua o, en su caso, con un vehículo adecuado para asegurar un buen contacto con la piel. Cuando se utiliza un vehículo (que no sea agua), debe tenerse en cuenta la influencia del vehículo en la penetración de la sustancia problema en la piel. La sustancia problema líquida se utiliza generalmente sin diluir.

Si la muestra enviada requiere del uso de un vehículo diferente al agua para su administración, la prueba tendrá un coste extraordinario.