Hipersensibilidad cutánea in vitro. Método h-CLAT (human Cell-Line Activation Test).

(Norma Standard OECD 442E: 2017)

Prueba acreditada por ENAC.

Prueba con el certificado de Buenas prácticas de laboratorio (BPLs).

 

La dermatitis alérgica por contacto (CAD: Contact Allergic Dermatitis), es una respuesta inmunológica alterada frente a determinadas sustancias químicas que son capaces de inducir en el sistema inmunológico una respuesta de hipersensibilidad retardada (tipo IV), con participación de las células TDTH.

Algunas sustancias químicas, por su estructura molecular son más proclives que otras a inducir una respuesta de tipo de hipersensibilidad retardada (tipo IV). Por esta razón, cuando se utilizan sustancias químicas incorporadas a productos cosméticos que entran en contacto con la piel, debe descartarse que puedan inducir un fenómeno de hipersensibilidad retardada.

Para detectar la capacidad de inducir respuestas de hipersensibilidad retardada se han utilizado pruebas con animales de experimentación, como son: 1) Guinea Pig Maximization Test –GPMT; 2) Método del parche oclusivo de Büehler; 3) Prueba del ganglio local en ratón –LLNA: Local Lymph Node Assay). Esta última prueba (LLNA) se considera actualmente el método de referencia, pero tropieza con el inconveniente de utilizar H3-timidina cuya incorporación se detecta en los ganglios linfáticos locales.

La preocupación social progresiva por el bienestar animal y su uso en ensayos de laboratorio, ha sido el motivo por el que a lo largo de los años se hayan investigado métodos alternativos al uso de animales de experimentación en los laboratorios. En este sentido desde marzo de 2013, quedó prohibida en la Comunidad Europea, su utilización con productos cosméticos, por lo que deben utilizarse métodos alternativos.

Entre los métodos alternativos para detectar la sensibilización cutánea de sustancias químicas se han desarrollado varios métodos:

1) Activación de células dendríticas. El problema del uso de las células dendríticas reside en que la respuesta está condicionada por el origen de la sangre periférica utilizada para obtener las células dendríticas, y en el requerimiento de un volumen considerable de sangre.

2) Activación de células subrogadas de las células dendríticas, como son las células TPH-1, para obviar los problemas mencionados con las células dendríticas. Las células TPH-1 son una línea celular monolítica humana leucémica, que puede activar una serie de señales de transducción con expresión de genes y moléculas coestimuladoras tras la exposición in vitro a sustancias sensibilizantes cutáneas.

La prueba h-CLAT (human Cell-Line Activation Test) detecta los cambios fenotípicos, como es la expresión de los marcadores de superficie celular CD86 y CD54, expresados tanto en las células dendríticas como en las células TPH-1. La ventaja de estas últimas células es que tienen una expresión potenciada de los marcadores CD86 y CD54, al exponerse in vitro a sustancias sensibilizantes. La correlación entre los resultados obtenidos con la prueba h-CLAT y LLNA es de alrededor del 84%. Pueden darse algunos resultados falsos positivos y falsos negativos debido a que algunas sustancias químicas inducen uno de los dos marcadores y otras sustancias otro.