Examen microbiológico de productos no estériles. Pruebas de detección y recuentos microbiológicos (Eur Pharmacopoeia 11, capítulos 2.6.12 y 2.6.13.).
Estos ensayos describen el recuento cuantitativo de bacterias mesófilas y hongos que pueden desarrollarse en condiciones aerobias, para determinar si una sustancia o preparado cumple una especificación de calidad microbiológica, indicando el número de muestras a estudiar y la forma de interpretar los resultados obtenidos (Eur. Pharm. Capítulo 2.6.12) y para determinar la presencia de algunos tipos específicos de microorganismos (Eur. Pharm. Capítulo 2.6.13). Estos métodos no son aplicables a productos que contengan microorganismos viables como principios activos.
Como norma general, estos ensayos deben realizarse con métodos que garanticen la ausencia de contaminación microbiana externa con algún microorganismo en el producto en ensayo. Además, se debe eliminar o neutralizar la actividad antimicrobiana que puedan contener los productos y evitar cualquier efecto tóxico para los microorganismos durante la realización del ensayo. Los métodos utilizados para el recuento pueden ser métodos de filtración por membrana o de recuento en placa. El método del Número Más Probable (NMP) es el método menos preciso para la enumeración microbiológica y solo debe utilizarse para productos con una carga microbiana muy baja, en cuyo caso puede ser el método más adecuado. El método elegido depende de la naturaleza del producto y del límite de microorganismos requerido. Para la detección de microorganismos específicos, la farmacopea describe un procedimiento de detección e identificación para cada microorganismo. En los ensayos se incluye un control negativo con el diluyente utilizado en lugar del preparado farmacéutico en prueba, en el que no se debe obtener crecimiento de microorganismos.
El cápitulo 2.6.12 describe la determinación del TAMC (recuento total de microorganismos aerobios) y del TYMC (recuento total combinado de levaduras y mohos). En estos ensayos se deben utilizar 10 g o 10 mL del producto con las siguientes excepciones: para líquidos o sólidos en forma líquida o sólidos destinados a ser utilizados en forma de aerosol, se deben utilizar 10 envases. Para productos en forma de parches transdérmicos, 10 muestras de parches. Para películas bucodispersables, se debe analizar una muestra de 10 películas. Las cantidades pueden reducirse para sustancias activas que se formulen en las siguientes condiciones: cantidades por dosis unitaria (por ejemplo, comprimidos, cápsulas, inyección) que sean iguales o inferiores a 1 mg o la cantidad por gramo o mililitro (para productos presentados en dosis unitarias) sea inferior a 1 mg. En estos casos, la cantidad ensayada no es inferior a la cantidad presente en 10 dosis unitarias o 10 g o 10 mL de producto. Para materiales como sustancias activas donde las cantidades en las cantidades de muestra son limitadas o los tamaños de lote son demasiado pequeños (menos de 1.000 mL o 1.000 g), la cantidad ensayada puede ser el 1 por ciento del lote, a menos que se especifique lo contrario, se prescriba una cantidad menor o se justifique y autorice. Para los productos en los que el número total de unidades en un lote es inferior a 200 (por ejemplo, muestras utilizadas en un ensayo clínico), el tamaño de la muestra puede reducirse a 2 unidades, o 1 unidad si el tamaño es inferior a 100. Las muestras deben seleccionarse al azar del lote o de los recipientes disponibles para la preparación. Para obtener la muestra requerida, mezclar el contenido de un número suficiente de recipientes para proporcionar la muestra.
Se considera el recuento microbiano aeróbico total (TAMC) a la cantidad de UFC encontrada en medio TSA, mientras que el recuento total de levaduras/mohos (TYMC) se considera igual al número de UFC encontrado en agar Saboraud-dextrosa.
El capítulo 2.6.13 de la farmacopea especifica la detección y el recuento de algunos microorganismos, para determinar su ausencia o presencia limitada:
- Bacterias Gram negativas tolerantes a bilis.
- Candida albicans.
- Clostridia.
- Escherichia coli.
- Pseudomonas aeruginosa.
- Salmonella spp.
- Staphylococcus aureus.
Para cada determinación se requiere 1 g o 1 mL del producto a examinar, excepto para la determinación de Salmonella spp., que se requieren al menos 10 g o 10 mL y para la determinación de Clostridia que se requieren no menos de 2 g o 2 mL de producto.
Las muestras para cualquiera de las determinaciones deben seleccionarse al azar del lote o de los recipientes disponibles. Si es necesario, para obtener la muestra requerida, se debe mezclar el contenido de un número suficiente de recipientes.
El capítulo general 5.1.4 de la farmacopea europea, describe los criterios de aceptación para la calidad microbiológica de las formas de dosificación no estériles y sustancias no estériles de uso farmacéutico.