Astrovirus – Diagnóstico molecular (RT-PCR)

Información 28-10-15.

Astrovirus es un virus de la familia Astroviridae. Esta familia se subdivide en dos géneros: género Mamastrovirus que infecta a los humanos y género Avastrovirus que infecta a las aves. Las especies del género Mamastrovirus incluyen A. bovino, A. felino, A. humano, A. ovino, A. porcino, A. de vison. El género Avastrovirus, causante de infección en las aves, incluye las especies A. de pollo, A. de pato y A. de pavo. Los astrovirus humanos (HastV) son una de las principales causas de gastroenteritis aguda (GEA) en todo el mundo, llegando a constituir en algunas regiones geográficas la segunda causa principal de GEA, por detrás de los Rotavirus.

Astrovirus tiene un tamaño de 28 a 35 nm de diámetro, con simetría icosaédrica y una estructura característica de la superficie en forma de estrella de cinco o seis puntas cuando se observa por microscopía electrónica. Es uno de los virus más resistente a los agentes físicos y químicos, manteniendo su infectividad incluso tras la exposición a 60ºC durante 10 minutos y tras la exposición a pH 3.Tienen un genoma de ARN monocatenario positivo y por lo tanto se incluyen en el Grupo IV de la clasificación de Baltimore. La cadena de ARN tiene un final poli-A en el extremo 3‘, pero carece de 5´-CAP. Excluyendo la poliadenilación en el extremo 3´, el genoma tiene 6.8 a 7.9 kb de longitud y está organizado en tres marcos de lectura abierta (ORF: Open Reading Frame), con una superposición de aproximadamente 70 nucleótidos entre ORF1a y ORF1b. El restante ORF se conoce como ORF2. Se conocen 8 serotipos e HastV, de los que HastV-1 es el serotipo/genotipo más frecuente.

En las personas, la infección por Astrovirus se transmite por vía fecal-oral,  habitualmente a través de la ingestión de los alimentos y el agua contaminada, aunque también se puede transmitir por contacto persona-persona. Debido a que las personas infectadas generalmente excretan gran cantidad de HastV (Human Astrovirus) en las heces, estos virus contaminan fácilmente las aguas residuales. Se han detectado HastV en fuentes de agua y en sistemas de abastecimiento de agua de consumo. Una vez en el organismo, Astrovirus infecta las células epiteliales del intestino y se multiplica en los enterocitos maduros en la mayor parte de la porción apical de las vellosidades. En el interior de los enterocitos infectados se observan acúmulos virales en los lisosomas y las vacuolas intracitoplásmicas, o bien, como inclusiones intracitoplásmicas en diferentes vacuolas. Este agente provoca alteraciones de la célula como degeneración del núcleo, respuesta inflamatoria y alteraciones enzimáticas.

El periodo de incubación es de 3 a 4 días y los síntomas generalmente persisten de 2 a 3 días, aunque pueden persistir hasta 12 días. En las personas, las manifestaciones clínicas de infección por Astrovirus incluyen diarrea, náuseas, vómitos, fiebre, malestar general, cefaleas, dolor abdominal y anorexia. La duración aproximada de estos síntomas es de aproximadamente 4 días. En algunos casos, la infección es más intensa y se acompaña de intolerancia a la lactosa. La infección por Astrovirus no suele ser una situación grave y sólo en algunos casos raros causa deshidratación. Las personas de todas las edades son susceptibles a la infección por astrovirus, pero los niños, los ancianos, y las personas inmunocomprometidas son más propensas al contagio, en las que puede provocar diarreas graves y crónicas. En los niños se considera la segunda causa de diarrea vírica. Se estima que la mayoría de los niños adquieren anticuerpos alrededor de los 5 años edad, lo que les proporciona protección en etapas adultas, hasta que el título de anticuerpos comienza a disminuir con el tiempo. A los 10 años de edad el 80% de la población posee evidencias serológicas de haber padecido una infección previa. Así mismo, se estima que la incidencia de la infección por Astrovirus varía en función de la temporada. En zonas geográficas con climas templados la infección es mayor durante los meses de invierno, mientras que en las regiones tropicales la prevalencia es más alta durante la estación lluviosa. Se han descrito brotes de infección por este virus en centros como guarderías infantiles y de atención de adultos ancianos.

Pruebas recomendadas para el diagnóstico:

Este virus no puede cultivarse en cultivo celulares habituales, por lo que las únicas alternativas posibles para el diagnóstico clínico son:

• Aislamiento en cultivo: este virus no se aisla en cultivo habitualmente. Puede infectar cultivos celulares de células Caco-2 tratadas con tripsina, o células HT-29 (Human Colon Adenocarcinoma), pero no es un método utilizado en diagnóstico. Los cultivos celulares con la finalidad de aislar varios virus enteropatógenos como las células BGMK (Buffalo Green Monkey Cells), permiten aislar Adenovirus tipos 40 y 41, aunque no produzcan efecto citopático en estas células, y otros virus entéricos, pero sin embargo, Astrovirus, no se replica en estas células.

• Observación el virus por microscopía electrónica: detección de virus en muestras fecales mediante observación de purificado de heces por microscopía electrónica. Esta observación requiere una preparación de las muestras y un equipamiento que no son habituales para el diagnóstico clínico.

• Detección de antígeno vírico: para detectar antigéno vírico existen varios formatos de reacción inmunoenzimática (ELISA o inmunocromatografía) o de aglutinaciones pasivas. En general, estos métodos poseen baja sensibilidad.

• Detección de su ácido nucleico (ARN), mediante métodos de RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction), de PCR en tiempo real (Real Time PCR), o de tecnología en plataformas Luminex xMAP. Estas pruebas se consideran las más sensibles, y de mayor utilidad en el diagnóstico.

Pruebas realizadas en IVAMI:

• Diagnóstico molecular (RT-PCR: Reverse transcriptase Polymerase Chain Reaction).

Muestra recomendada:

• Heces (10 mL o g).
• Vómitos (10 mL o g).

Conservación y envío de la muestra:

• Refrigerada (preferido) durante menos de 2 días.
• Congelada: más de 2 días.

Por tratarse virus ARN, debe conservarse congelada, o al menos refrigerada el menor tiempo posible, evitando congelaciones repetidas en caso de congelarse.

Plazo de entrega:

• Diagnóstico molecular (RT-PCR): 24 a 48 horas.

Coste de la prueba:  

           Consultar a ivami@ivami.com