Actinobacillus pleuropneumoniae – Diagnóstico molecular (PCR).

Actinobacillus pleuropneumoniae (previamente Haemophilus pleuropneumoniae), es un cocobacilo gramnegativo, capsulado, inmóvil anaerobio facultativo, patógeno respiratorio para los cerdos. Estructuralmente, en la membrana externa, posee el lipopolisacárido (LPS) y distintos tipos de proteínas de gran interés. La cápsula es, también, una estructura de gran importancia que se relaciona con la patogénesis y que es muy útil en la clasificación. En aislamientos recientes se ha descrito la presencia de fimbrias.

Se han descrito 15 serotipos diferentes de Actinobacillus pleuropneumoniae, según los diferentes polisacáridos capsulares expuestos. Existen dos biotipos diferentes, biovar 1 que incluye 13 serotipos diferentes y biovar 2 que incluye dos serovares. Las diferencias en la  virulencia, la inmunogenicidad y la distribución geográfica de todo el mundo contribuyen a la diversidad de los serotipos de A. pleuropneumoniae. Los 15 serotipos pueden dar lugar a la enfermedad, con un serotipo que generalmente predomina en una piara particular. La principal diferencia entre los serotipos es la expresión de toxinas Apx y otros factores de virulencia.

Esta bacteria causa la pleuroneumonía porcina, una enfermedad respiratoria altamente contagiosa, que afecta principalmente a los cerdos jóvenes, por lo general menos de 6 meses. La pleuroneumonía porcina es una de las enfermedades bacterianas más importantes de cuantas afectan al tracto respiratorio del ganado porcino. Todos los síntomas y signos de la pleuroneumonía porcina se pueden atribuir a los factores de virulencia de esta bacteria. El periodo de incubación puede variar en función de la edad del animal, su estado inmunitario, las condiciones ambientales y el grado de exposición al agente infeccioso, habiéndose descrito casos experimentales ocurridos desde unas horas postinoculación hasta varios días.

La infección por Actinobacillus pleuropneumoniae se produce por aerosol o por contacto directo entre animales enfermos y animales sanos. Se ha demostrado que A. pleuropneumoniae coloniza las tonsilas y el epitelio alveolar. En el pulmón el microorganismo es fagocitado rápidamente por los macrófagos alveolares, debido a la producción de las toxinas ApxI, ApxII y ApxIII que tienen un marcado efecto toxico para los macrófagos alveolares, por lo que la fagocitosis no actúa adecuadamente. Además, las toxinas también afectan a las células endoteliales de los capilares alveolares y sus efectos son los causantes de las lesiones típicas de esta enfermedad. La bacteria coloniza rápidamente al hospedador y se une a las células epiteliales de las amígdalas, desplazándose hacia abajo en el tracto respiratorio usando las fimbrias de tipo IV. A medida que las bacterias se dividen, liberan citotoxinas (en forma de toxinas APX), hemolisinas y los LPS de sus membranas externas. La lisis posterior de los macrófagos provoca la liberación de lisozimas, que a su vez causa el daño a los tejidos como se observa en la pleuroneumonía porcina. En particular, A. pleuropneumoniae activa la liberación de diversas citocinas como la interleucina 1β (IL-1β), IL-8 y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α). Varios factores de virulencia representan la notable patogenicidad de A. pleuropneumoniae. Los más importantes incluyen la producción y liberación de las toxinas APX, la capacidad de producir una biocapa, su componente de LPS, los polisacáridos de la cápsula, y su capacidad para sobrevivir dentro de un entorno de hierro limitado. De estos, los más importantes son su cápsula y la producción de toxinas Apx.

Los síntomas de la pleuroneumonía porcina incluyen dificultad respiratoria, exudado manchado de sangre, generalmente espumoso de la boca, fiebre, anorexia, diarrea leve, cianosis, letargo, y el aborto espontáneo en las cerdas. Puntualmente, A. pleuropneumoniae puede causar artritis, endocarditis y abscesos en diferentes localizaciones en algunos animales. Para los criadores de cerdos, el signo más frecuente es la muerte repentina de varios cerdos en un período corto de tiempo. En este sentido, la mortalidad pico se alcanza generalmente cuando los cerdos tienen alrededor de 10 a 16 semanas de edad. Los cerdos que sobreviven a la enfermedad permanecen como portadores y contagian la bacteria a otros cerdos. Una de las complicaciones más frecuentes de la pleuroneumonía porcina es la pericarditis serofibrinosa con desarrollo posterior de adherencias y engrosamiento fibroso. Aunque en la mayoría de los casos las lesiones están limitadas a la cavidad torácica, a veces se puede observar también peritonitis fibrinosa, meningoencefalitis purulenta, endocarditis ulcerosa, artritis y osteomielitis.     

El curso clínico de la enfermedad puede adoptar tres formas distintas: hiperaguda, aguda o crónica. El cuadro hiperagudo y agudo es típico de explotaciones libres del agente, mientras que el cuadro crónico está más relacionado con áreas donde la enfermedad presenta carácter endémico.

• • • Cuadro hiperagudo. Este cuadro, se caracteriza por la aparición repentina de algunos animales muy enfermos con hipertermia (41,5 - 42ºC), anorexia y apatía. Pueden presentarse periodos breves de vómitos, diarrea leve, tos, y epistaxis. Además, puede producirse un incremento del pulso, insuficiencia cardíaca y respiratoria, así como cianosis en la piel de la nariz, orejas, patas y, finalmente, de todo el organismo. En la fase terminal se presenta disnea grave con respiración bucal, disminución brusca de la temperatura rectal así como secreción abundante, espumosa y teñida de sangre a través de los orificios nasales y de la boca, antes de la muerte. En general, el animal afectado fallece dentro de las 24 a 36 horas del desarrollo de los síntomas clínicos. En animales jóvenes la muerte puede presentarse tan rápidamente que no lleguen a observarse los síntomas anteriormente mencionados.

• • • Cuadro agudo. Este cuadro se caracteriza por la aparición de síntomas respiratorios graves: tos, disnea y ocasionalmente respiración por la boca. Además, se presenta hipertermia, insuficiencia cardíaca y circulatoria con edema en las extremidades. La evolución de la enfermedad difiere de unos animales a otros, dependiendo de la extensión de las lesiones pulmonares y del tiempo de iniciación del tratamiento. En los individuos con un cuadro agudo, la muerte se debe a una combinación de un fallo cardíaco y de toxinas producidas por el organismo. Es posible observar cualquier tipo de evolución: desde la muerte de animales en pocos días hasta la evolución a la forma crónica pasados unos días del inicio de la enfermedad.

• • • Cuadro crónico. Este cuadro aparece después del cuadro agudo o al mismo tiempo. No existe fiebre y se observa tos variable e intermitente. Otros signos y síntomas incluyen apetito disminuido, intolerancia al ejercicio (estos animales afectados son los últimos en levantarse cuando se entra en la explotación) y neumonía caracterizada por respiración abdominal debido a una pleuritis muy dolorosa. Los cerdos afectados pueden transportar el microorganismo durante largos períodos de tiempo y por lo tanto representan un riesgo potencial para los cerdos más jóvenes.

La presentación típica de A. pleuropneumoniae en cerdos son las lesiones limitadas características en los lóbulos medios, craneales y caudales del pulmón. Las áreas de crecimiento neumónica graves son oscuras y consolidadas. En el caso de los cerdos infectados crónicamente, se encuentran con frecuencia adherencias pleurales y abscesos. Los estudios histológicos de tejido pulmonar infectado normalmente muestran necrosis pulmonar, infiltración de neutrófilos, la activación de macrófagos y plaquetas, y un exudado. Además, la  hemólisis intensa o hemorrágica también está presente.

Los hallazgos post mortem confirmarán el diagnóstico. Las lesiones son causadas en gran parte por las toxinas producidas. Estos incluirán; consolidación hemorrágica cerca de los bronquios principales o el lóbulo de pulmón diafragmática, que generalmente se localiza. También puede ser visible la necrosis y la pleuritis fibrinosa. En los animales recuperados, puede haberse desarrollado cicatrización pulmonar y adherencias pleurales.

Pruebas realizadas en IVAMI:

• Diagnostico molecular (PCR), para detectar ADN de Actinobacillus pleuropneumoniae.

Muestra recomendada:

• Exudado respiratorio tomado con torunda.

Conservación y envío de la muestra:

• Refrigerada (preferido) durante menos de 2 días.
• Congelada: más de 2 días.

Plazo de entrega:

• Diagnóstico molecular (PCR): 24 a 48 horas.

Coste de las pruebas

• Consultar a ivami@ivami.com.