Mycoplasma agalactiae y grupo Mycoplasma mycoides (M. mycoides subsp. mycoides biotipo LC; M. mycoides subsp. capricolum; M. mycoides subsp. capripneumoniae; M. mycoides subsp. mycoides biotipo SC; Mycoplasma bovino biotipo 7, y M. putrefaciens) – Diagnóstico molecular (PCR) e identificación.

 

Los micoplasmas son bacterias sin pared celular y con un genoma muy pequeño, entre los que se encuentran varias especies productoras de enfermedades en animales y en personas, La mayoría requieren condiciones de laboratorio especiales, con medios de cultivos complejos indefinidos, por su limitada capacidad de biosíntesis, y bastante tiempo comparado con otras bacterias (días o semanas). El desarrollo lento dificulta su identificación fenotípica con pruebas metabólicas lo que obligó a desarrollar métodos serológicos utilizando anticuerpos específicos de especie para caracterizar sus antígenos. Sin embargo, los métodos de identificación serológica tropiezan con el inconveniente de las reacciones de antigenicidad cruzada existente entre subespecies y tipos, junto con elevada heterogeneidad antigénica existente dentro de algunos tipos y subespecies. Hoy día, los métodos serológicos están siendo sustituidos por métodos moleculares de amplificación y secuenciación de su ADN. DE esta forma, mediante comparación de la secuencia 16S rRNA se concluyó que Mycoplasma mycoides subsp. mycoides biotipo LC (Large colonies) y Mycoplasma mycoides subsp. capri, compartían un 99,9% de homología y debían considerarse dos fenotipos de la misma subespecie.

 

Existen varias especies de interés en enfermedades de animales. Entre ellos se encuentran:

 

• Mycoplasma agalactiae, agente de la agalactia contagiosa (CA: Contagious agalactia), al producir una mastitis primaria, acompañada a veces de artritis secundaria y queratitis en ovejas y cabras, extendida en el área mediterránea. Esta especie, Mycoplasma agalactiae, parece ser la única especie productora de este proceso en ovejas. En las cabras puede provocarla esta especie junto con otras que describimos a continuación.

• Mycoplasma mycoides “cluster”. Este grupo comparte características antigénicas detectadas por reacciones cruzadas serológicas que hace difícil su diferenciación. En es te grupo se diferencian actualmente 6 subespecies:

• • Mycoplasma mycoides subsp. mycoides biotipo de grandes colonias (Large colonies biotype), productor de agalactia contagiosa. Esta subespecie se considera actualmente equivalente a la anterior subespecie Mycoplasma mycoides subsp. capri, ya que comparten 99,9% de homología a nivel de 16S rRNA.
  • Mycoplasma mycoides subsp. capricolum, (sin. Mycoplasma capricolum s

• • Mycoplasma mycoides subsp. capripneumoniae, productor de la pleuropneumonia contagiosa (CCPP: Contagious caprine pleuroppneumonia), en cabras.

• • Mycoplasma mycoides subsp. mycoides biotipo de colonias pequeñas (Small colony biotype), productor de la peripneumonia bovina contagiosa, en bóvidos.

• • Mycoplasma spp. bovino tipo 7, productor de neumonitis, mastitis, artritis y abortos en vacas lecheras de Australia.
  •  Mycoplasma putrefaciens, también se considera dentro del grupo de Mycoplasma mycoides por tener una elevada similitud en la secuencia de 16S rRNA y región espaciadora intergénica (ISR: Intergenic Spacer Region) 16S-23S. También es causante de agalactia contagiosa, aunque no se han descrito lesiones oculares.

 

Otras dos especies, Mycoplasma cottewii y Mycoplasma yeatsii, están muy relacionados con Micoplasma putrefaciens, pero no pertenece al grupo Mycoplasma mycoides.

 

La agalactia contagiosa CA: Contagious agalactia), es una enfermedad infecciosa grave en ovejas y cabras, caracterizada por mastitis, artritis y queratoconjuntivitis, con amplia distribución mundial, con un impacto elevado en Europa, Norte de África y Asia occidental, que se extiende rápidamente en los rebaños, por lo que es importante disponer de procedimientos diagnósticos específicos y rápidos para detectar la infección.

 

Este proceso tiene varias especies causantes, entre ellas Mycoplasma agalactiae. Cuando está producida por la subespecie Mycoplasma mycoides subsp. mycoides biotipo de colonias grandes (Large colonies), Mycoplasma mycoides subsp. capricolum, la agalactia suele asociarse a signos clínicos de distress respiratorio. En las áreas donde este proceso es endémico sólo suelen producir mastitis asintomáticas, raramente asociado con signos clínicos de artritis o queratoconjuntivitis.

 

Los animales infectados asintomáticos pueden eliminar micoplasmas durante muchos años después de la infección inicial y por ello juegan un papel muy importante en la epidemiología de este proceso, haciendo difícil su profilaxis y erradicación.

 

Pruebas recomendadas para el diagnóstico:

 

El diagnóstico serológico para detectar anticuerpos por los varios métodos disponibles (ELISA, Inhibición deo crecimiento, etc.), está limitado por las reacciones cruzadas entre Mycoplasma agalactiae y Mycoplasma bovis, y las subespecies del grupo Mycoplasma mycoides. Además la seroconversión es tardía y solo se detectan anticuerpos significativos pasados 25 ó 30 días.

 

Los métodos de amplificación de ADN son muy útiles para diferenciar las subespecies del grupo de Mycoplasma mycoides. Además, evitan la reactividad cruzada y la variabilidad inherente a los métodos de identificación serológica, y al mismo tiempo permiten una estandarización más fácil entre laboratorios.

 

Pruebas realizadas en IVAMI:

 

• Diagnóstico molecular mediante PCR.

Muestra recomendada:

 

• En caso de mastitis, exudado mamario, leche o sus derivados (queso).
• En caso de afección respiratoria, exudado respiratorio.
• En casos de artritis, exudado de articulación tomado por punción (0,5 a 1 mL en tubo estéril).

 

Conservación y envío de la muestra:

 

• Refrigerada (preferido) durante menos de 2 días.
• Congelada: más de 2 días.

 

Plazo de entrega:

 

• Diagnóstico molecular (PCR): 24 a 48 horas.
• Identificación molecular (secuenciación): 4 a 5 días.

 

Coste de la prueba:  

 

Consultar a ivami@ivami.com