Instituto Valenciano de Microbiología
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Virus en aguas. Método de norma XP T90-451: 1996.
 
Esta prueba se realiza según la norma francesa XP T90-451: 1996, y se utiliza, para detectar virus viables en cultivo celular con la correspondiente cuantificación de los viriones presentes, y para detectar genoma vírico, mediante pruebas de RT-PCR o de PCR.
 
Con este procedimiento se realiza la concentración de los virus presentes en el volumen de agua deseado (mínimo recomendado 20 litros), mediante adsorción a lana de vidrio dispuesta en sistemas de filtración bajo presión. Una vez filtrado el volumen de agua, se eluyen los virus del filtro de lata de vidrio, se concentran mediante floculación, y se descontamina de bacterias por filtración con membrana. La suspensión vírica obtenida, se cuantifica mediante el cálculo de la TCID50 realizando siembras de diluciones del eluido en 12 replicas de cultivo de células BGM para cada dilución ensayada, calculándose el número de viriones presentes utilizando la fórmula de Spearman-Karber.
 
Con ello pueden cuantificarse únicamente los viriones que provocan un efecto citopático en las monocapas celulares utilizadas, como son la mayoría de los Enterovirus, aunque no todas las especies y tipos  pueden detectarse mediante la inoculación en cultivo celular. El tipo de virus encontrado se identificará mediante prueba de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) seguido de secuenciación. Además, pueden detectarse otros virus que no provocan efecto citopático en los cultivos  celulares habituales (virus de hepatitis A, virus de hepatitis E, Norovirus, ......), mediante pruebas de RT-PCR en el eluido del adsorbido durante la filtración.