ASTM E645-18. Evaluación de microbicidas usados en sistemas de enfriamiento de aguas (Standard Practice for Evaluation of Microbicides Used in Cooling Water Systems).
Prueba acreditada por ENAC.
Esta norma describe un procedimiento para evaluar la eficacia de los microbicidas (bactericidas, fungicidas y/o alguicidas), que se utilizan para controlar el crecimiento microbiano en sistemas de enfriamiento de aguas. Para la evaluación según esta norma se utilizan agua de refrigeración y/o sedimentos/biopelículas obtenidas de la realidad. La adición de sedimentos/biopelículas aborda la necesidad de incluir las principales fuentes de microorganismos en los sistemas de agua de refrigeración. Sin embargo, incluso con esta adición, los resultados de laboratorio pueden no ser totalmente predictivos de la eficacia microbicida en la realidad. Esto es debido a que las condiciones que pueden afectar la eficacia de los microbicidas en la realidad son difíciles de simular en el laboratorio. Estas condiciones que afectan a la eficacia de los microbicidas incluyen la tasa de purga, la adición de agua de reposición, dureza del agua, fugas de hidrocarburos, pH, cantidad de sedimentos presentes, sólidos disueltos, presencia de microbios en el interior de las biocapas (biofilms), y presencia de otros sedimentos (sales, minerales de hierro, sustancias orgánicas, etc.) en las superficies. La principal dificultad de este método reside en la dificultad para enumerar todos los microbios presentes en el agua debido a su gran diversidad y requerimientos diferentes para su cultivo lo que implica utilizar distintos medios de cultivo para conseguir una recuperación adecuada.
La norma ASTM E645 está destinada a la evaluación de microbiocidas utilizando agua de refrigeración sintética o real. Existen tres posibilidades para realizar pruebas 1) evaluar la actividad biocida contra los microorganismos presentes en el agua de refrigeración real, 2) probar la actividad biocida contra los microorganismos presentes en los depósitos microbiológicos (biopelículas) de sistemas de refrigeración operativos, o 3) evaluar la actividad biocida contra cepas de microorganismos conocidos por contaminar los sistemas de agua de refrigeración, añadiéndolos al agua de refrigeración utilizada sólo como sustrato (previamente esterilizada) o agua de refrigeración sintética.
En la prueba, los microbicidas son evaluados contra microbios del agua o de sedimentos, bajo condiciones que simulan un sistema de agua de refrigeración. Para ello, los microbicidas, en la concentración/es elegida/s por el fabricante, son enfrentados al agua de refrigeración o a la suspensión de sedimentos. El tiempo de contacto debe elegirse por el fabricante, pero la norma indica que debe incluirse como obligatorio un tiempo de 3 ± 1 horas y 24 ± 0,25 horas. La temperatura de contacto se recomienda que sea de ± 5ºC la temperatura existente en el desagüe, cuando se tomó la muestra de agua/sedimento para realizar la prueba. Cuando la prueba se realiza con agua de refrigeración sintética, y se añaden microorganismos conocidos como inóculo, el cliente debe elegir la temperatura de prueba, intentado simular las condiciones reales de uso. De acuerdo con la norma ASTM E645, el volumen de solución madre de microbiocida agregado no debe exceder el 1% del volumen total. Tras el tiempo de contacto elegido, se determina el número de microbios (bacterias aerobias, bacterias anaerobias, hongos o algas) y se compara con los valores al inicio (basales) de la prueba no expuestos al producto.
El fabricante debe decidir las condiciones en las que desea que se realice la evaluación (agua o sedimentos), si desea emplear agua de refrigeración real o simulada, la concentración/es de uso del producto, el/los tiempo/s de contacto, y la temperatura durante el contacto, la existente en el sistema de refrigeración del que se tomó la matriz para la prueba (agua o sedimento) u la indicada si se emplea agua de enfriamiento sintética.
Los resultados se expresan según la reducción logarítmica de cada grupo de microorganismos (bacterias aerobias, bacterias anaerobias, hongos y algas) obtenida para la concentración de biocida probada en relación con el recuento inicial de la muestra control que no ha sido expuesta al producto, considerándose que una reducción de 1 log equivale al 90% de muerte; 2 log equivale a 99%; 3 log equivale a 99,9% y 4 log a 99,99%.
La concentración mínima bactericida para considerar eficaz al producto dependerá de los requerimientos del fabricante o de los requisitos para su registro. En la mayoría de los casos un 90% de muerte (reducción de 1 log), es el mínimo nivel considerado aceptable para mostrar eficacia de un microbicida.
Al realizar la prueba con agua de refrigeración sintética, adicionando cepas de microorganismos conocidos, la norma ASTM E645 no establece los microorganismos que deben probarse para cada actividad. En IVAMI, como procedimiento interno hemos establecido que:
- Para la actividad bactericida: Una prueba empleando como inóculo una mezcla de S. aureus y P.aeruginosa, y una prueba independiente para Legionella pneumophila.
- Para la actividad fungicida: Una prueba empleando como inóculo una mezcla de C.albicans y A.brasiliensis.
- Para actividad alguicida: Una prueba independiente con Chlorella vulgaris.
No obstante, el cliente puede elegir cualquier microorganismo (bacteria, hongo o alga) que le interese ya que la norma no especifica ningún microorganismo obligatorio.