Examen microbiológico de productos no-estériles. Pruebas de detección y recuentos microbiológicos (Eur. Pharm. 2.6.12 y Eur. Pharm. 2.6.13. Eur Pharmacopoeia 11) 

Estas pruebas describen el recuento cuantitativo de bacterias mesófilas y de hongos que pueden desarrollarse en condiciones aerobias, y determinar si una sustancia o preparación cumple con una especificación microbiológica de calidad, indicando qué número de muestras deben estudiarse y cómo interpretar los resultados obtenidos (Eur. Pharm. 2.6.12) y excluir la presencia de algunos microorganismos concretos (Eur. Pharm. 2.6.13). Estos métodos no son aplicables a productos que contengan microorganismos viables como ingrediantes activos.

Como norma general estas pruebas deben realizarse con métodos microbiológicos que garanticen que no exista una contaminación microbiana externa del producto sometido a las pruebas con cualquier microorganismo durante la realización de los métodos. Además, debe eliminarse o neutralizarse la actividad antimicrobiana que puedan contener los productos y debe evitarse cualquier efecto tóxico para los microorganismos parta así poder garantizar que si están presenten se detecten. Los métodos utilizados para el recuento pueden ser la filtración por membrana o los métodos de recuento en placa. El método del número más probable (NMP) es el método menos exacto para el recuento microbiológico, y debe ser utilizado únicamente para productos con muy poca carga microbiana, en cuyo caso puede ser el método más adecuado. El método elegido depende de la naturaleza del producto y el límite de microorganismos requerido. En las pruebas se incluyen un control negativo con el diluyente utilizado en lugar de la preparación farmacéutica sometida a prueba, en el que no debe obtenerse crecimiento de microorganismos.

En las pruebas deben utilizarse 10 g ó 10 mL del producto. En el caso de líquidos o sólidos que estén destinados a utilizar en forma de aerosol a partir de formulaciones líquidas o sólidas se deben, muestrear 10 envases. Para productos en forma de paches transdérmicos, deben muestrearse 10 parches. Las cantidades pueden reducirse para sustancias activas que sean formuladas en las siguientes condiciones: cantidades por dosis unitaria (e.gr. tabletas, cápsulas, inyectable) con cantidades igual o inferior a 1 mg o cuando la cantidad por gramo o mililitro (para productos presentados en dosis unitaria) sea menor a 1 mg. En estos casos la cantidad probada no es inferior que la cantidad presente en 10 dosis unitaria o 10 g o 10 mL de producto. Para materiales de sustancias activas en las que las cantidades de muestras sea limitada o los tamaños de los lotes sean demasiado pequeñas (menores de 1.000 mL o 1.000 g), la cantidad probada puede ser el 1 por ciento del lote, a menos que se prescriba una cantidad menor por razones justificadas y autorizadas. Para productos en los que la cantidad total del número unidades en un lote sea menor de 200 (por. ej., muestras utilizadas en un ensayo clínico), el tamaño de la muestra puede reducirse a 2 unidades, o a 1 unidad si el tamaño sea inferior a 100.

Las muestras deben seleccionarse al azar a partir del lote o de los contenedores disponibles con el producto. Para obtener la muestra requerida, mezclar el contenido de un número suficiente de contenedores para proporcionar la muestra.

El apartado 2.6.12 de la Eur. Pharm., describe la determinación del TAMC (Total Aerobic Microbial Count) y TYMC (Total combined Yeast/Molds Counts), mientras que el apartado 2.6.13 de la Eur. Pharm. 2.6.13, especifica el procedimiento de detección y recuento de algunos microorganismos concretos, cuya presencia debe excluirse, como son los siguientes:

-        Bacterias gran-negativas tolerantes a bilis,

-        Candida albicans.

-        Clostridia.

-        Escherichia coli.

-        Pseudomonas aeruginosa.

-        Salmonella spp.

-        Staphylococcus aureus.