Ecotoxicidad - Daphnia magna: Prueba de reproducción (OECD 211: 2012).

Esta prueba tiene como objetivo evaluar los efectos de productos químicos en la reproducción de Daphnia magna. Para ello, hembras jóvenes de Daphnia de menos de 24 horas de edad al comienzo de la prueba, se exponen al producto de ensayo añadidos al agua en un rango de concentraciones. La duración de la prueba es de 21 días. Al final de la prueba, se evalúa el número total de crías vivas producidas. Para ello deben excluirse de los cálculos las crías producidas por los adultos que mueren durante la prueba.

La reproducción de los animales puede expresarse de varias maneras (por ejemplo, como el número de crías vivas producidas por cada animal por día desde el primer día) pero esto debe informarse además del número total de nuevas crías vivas producidas al final de la prueba. La capacidad reproductiva de los animales expuestos al producto probado se compara con la de los controles para determinar la concentración mínima con efecto (LOEC: Lowest Observed Effect Concentration) y así mismo la concentración sin efecto (NOEC: No Observed Effect Concentration). Además, si es posible, los datos se analizan utilizando un modelo de regresión para estimar la concentración que causaría una reducción determinada porcentual en la capacidad reproductora es decir la EC (e. gr. EC50, EC20 o EC10). También debe informarse la supervivencia de los animales reproductores y el periodo transcurrido hasta la aparición de la primera cría. Pueden examinarse también otros efectos sobre parámetros como el crecimiento (por ejemplo, la longitud) o la tasa intrínseca de aumento de la población.

La Guía OCDE indica que se puede realizar el ensayo semiestático o de flujo continuo. En nuestro laboratorio se realiza únicamente el ensayo semiestático que emplea al menos 10 animales mantenidos individualmente por serie de prueba y al menos diez animales en la serie control.

Para seleccionar un rango adecuado de las concentraciones de prueba, es útil disponer de los resultados de la prueba de inmovilización aguda (norma OECD 202: Daphnia spp. Acute Immobilization Test) con Daphnia magna. Cuando sea necesario puede realizarse una prueba de búsqueda de rango con al menos 5 concentraciones y 2 réplicas por concentración y control. La prueba definitiva debe realizarse con al menos 5 concentraciones dispuestas en serie geométrica con un factor que no exceda 3,2. Si se desea estimar la LOEC y la NOEC, la concentración de prueba más baja no debe producir un efecto significativo en la reproducción respecto al control y la concentración más alta debe producir un efecto significativo. Cuando la prueba de búsqueda de rango no muestre efecto en la reproducción a la concentración más alta o cuando se sospeche que la sustancia de prueba sea de nula o baja toxicidad, puede realizarse una prueba límite con una concentración de prueba y un control, con 10 réplicas en cada grupo. Si se observasen efectos en la reproducción en esta prueba debe realizarse la prueba completa.

Las sustancias de ensayo no deben probarse por encima de su límite de solubilidad en el medio de prueba. Las concentraciones de la muestra de prueba deben prepararse preferiblemente en el medio de ensayo sin usar solventes ni dispersantes. El cliente debe proporcionar la solubilidad del producto de ensayo. También, es conveniente disponer de la fórmula estructural, pureza de la sustancia, estabilidad a la luz, estabilidad en las condiciones de prueba, pKa, POW y resultados de pruebas de biodegradabilidad.