Determinación de la toxicidad letal aguda para los copépodos marinos (Copepoda, Crustacea) (Norma ISO 14669: 1999)
La norma ISO 14669 describe un método para determinar la toxicidad aguda para una de tres especies específicas de copépodos marinos (Copepoda, Crustacea) de sustancias químicas solubles o que puedan mantenerse como una suspensión o dispersión estable, efluentes industriales o aguas residuales, (tratados o sin tratar, tras decantación, filtración o centrifugación si fuera necesario), o aguas marinas o estuarinas. Los copépodos de ensayo pueden ser Acartia tonsa, Tisbe battagliai o Nitocra spinipes. El copépodo utilizado se expone a diversas concentraciones de la muestra de ensayo en agua marina sintética a 20°C ± 2°C y con un fotoperiodo de 16 horas de luz y 8 horas de oscuridad, y se registra la mortalidad de los copépodos a las 24 y 48 horas. Se determina la concentración letal media, CL50, que mata al 50% de los copépodos expuestos a las 24 ó 48 horas. Además, para ciertos fines, puede ser conveniente extender el período de exposición a 96 horas y determinar la CL50 a las 96 horas.
El ensayo se realiza en una o dos etapas: un ensayo preliminar que determina el rango de concentraciones a ensayar en el ensayo definitivo y proporciona un valor aproximado de la CL50 a las 48 horas, y un ensayo definitivo, realizado cuando el valor aproximado del ensayo preliminar no es suficiente, que permite calcular la CL50 a las 24 y 48 horas, y determina las concentraciones correspondientes al 0 % y al 100 % de mortalidad. Además, si la prueba se utiliza para sustancias químicas, se puede realizar un ensayo límite a 100 mg/L o a una concentración inferior que sea la máxima a la que la sustancia es soluble o se encuentra en dispersión estable en las condiciones del ensayo.
Para el ensayo preliminar, se debe seleccionar un amplio rango de concentraciones de la muestra elegidas en progresión geométrica (se recomienda un factor de 10 o 3,2 entre concentraciones), con un mínimo de cinco copépodos por concentración. Para el ensayo definitivo, se debe seleccionar un rango de concentraciones basándose en los resultados de la prueba preliminar, pero empleando un factor menor (normalmente 1,8 o 2) entre concentraciones. Es deseable que las concentraciones seleccionadas den como resultado dos o tres porcentajes de mortalidad entre el 10% y el 90%. Para cada concentración y cada control, se utiliza un mínimo de 20 copépodos (cuatro réplicas con cinco copépodos cada una). Por último, para el ensayo límite, se emplean 20 copépodos expuestos a una concentración única de 100 mg/L o a una concentración inferior (la máxima a la que la sustancia es soluble o se encuentra en dispersión estable en las condiciones de la prueba).