Evaluación biológica de productos sanitarios - Prueba de citotoxicidad in vitro (Norma ISO 10993-5: 2009-A11: 2025. Evaluación biológica de productos sanitarios. Parte 5: Ensayos de citotoxicidad in Vitro /Biological evaluation of medical devices-Part 5: In vitro cytotoxicity tests).
Prueba acreditada por ENAC.
Prueba con el certificado de Buenas prácticas de laboratorio (BPLs).
Esta norma describe el procedimiento para detectar la citotoxicidad in vitro de dispositivos médicos. La prueba puede realizarse con un extracto del dispositivo, con el dispositivo íntegro en contacto directo con las células o con el dispositivo íntegro realizando una aplicación indirecta por difusión en agar o por difusión a través de un filtro.
Los dispositivos deben estar estériles, o deben esterilizarse en el laboratorio según las directrices del fabricante, ya que deben ponerse en contacto con cultivos celulares estériles. Debe indicarse el método de ensayo y proporcionarse cuáles son las recomendaciones del fabricante para la solución de extracción en caso de que la prueba deba realizarse con un extracto del dispositivo, y las condiciones que puedan degradarlo para evitarse. Si existe alguna preferencia por el uso de alguna línea celular concreta, debe indicarse. Las células más habituales de uso disponibles son células Vero, células BHK-21, 3T3, .... A menos que el cliente indique otra elección, la prueba se realizará con células 3T3.
La prueba debe realizarse por triplicado, y debe incluir los controles positivos y negativos correspondientes. Las monocapas utilizadas se encontrarán en un estado de confluencia parcial y tras la exposición al dispositivo en cualquiera de sus formas, se seguirán durante entre 24 y 72 horas, dependiendo del método de ensayo y las células seleccionadas. La evaluación de la citotoxicidad puede realizarse cualitativa o cuantitativamente. Para las pruebas con el producto sanitario en contacto directo o con el extraído de un producto sanitario, se realizan ambas determinaciones, mientras que, para las pruebas mediante contacto indirecto, por difusión en agar o filtro, sólo podrá realizarse la evaluación cualitativa.
La citotoxicidad puede determinarse mediante métodos cualitativos o cuantitativos. La evaluación cuantitativa de la citotoxicidad es preferible. Los métodos cualitativos son apropiados para fines de cribado. En las pruebas con el dispositivo médico en contacto directo o con el extracto del mismo, a no ser que se solicite lo contrario, se realizan ambas determinaciones, mientras que en las pruebas por contacto indirecto, por difusión en agar o por filtración, solo se puede realizar la evaluación cualitativa. La evaluación cualitativa se realiza mediante el examen microscópico con una graduación de los efectos (0/1/2/3/4), indicando los grados 2 a 4 que el producto presenta citotoxicidad en diferentes grados. En la evaluación cuantitativa, debe determinarse el índice de muerte celular mediante tinción vital. La norma indica tres alternativas para los productos sanitarios líquidos o extractos: la reducción de captación de colorante rojo neutro (NRU: Neutral Red Uptake) (anexo A de la norma); la reducción del MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid] dando lugar a la formación de formazán (anexo C de la norma) o la reducción de XTT [2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino) carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide] dando lugar a la formación de formazán (anexo D de la norma). Cuando el índice de muerte celular calculado es superior al 30%, indica citotoxicidad. En IVAMI, de forma habitual se utiliza el método con rojo neutro para la evaluación de extraídos y productos sanitarios líquidos y la tinción vital con azul tripano para la evaluación de la citotoxicidad con un producto sanitario sólido mediante contacto directo.