Prueba de toxicidad oral aguda – Procedimiento de dosis fija. Guía OECD 420: 2001.
Prueba con el certificado de Buenas Prácticas de Laboratorio (BPLs).
El método de dosis fija descrito por la Guía OECD 420 se diferencia de los demás métodos en que evita utilizar la muerte de los animales como criterio de valoración y, en cambio, se basa en la observación de signos claros de toxicidad en uno de una serie de niveles de dosis fijas mediante alimentación forzada. Para evaluar la toxicidad oral aguda mediante el método de dosis fija, se dosifica a grupos de animales de un solo sexo en un procedimiento gradual utilizando dosis fijas. Primero se realiza un estudio de observación para permitir la selección de la dosis inicial adecuada para el estudio principal y luego se realiza el estudio principal. Dependiendo del resultado: muerte, toxicidad evidente o ninguna toxicidad, se finaliza la prueba, o se dosifica a los animales con otra concentración, para clasificar la sustancia de prueba según el Sistema Globalmente Armonizado (GHS) para la clasificación de sustancias químicas que causan toxicidad aguda. La especie de roedor preferida según las directrices de la OCDE es la rata, aunque se pueden utilizar otras especies de roedores. En nuestro laboratorio esta prueba se realiza con ratones o ratas.
En el estudio de observación, la sustancia de prueba se administra a animales individuales de forma secuencial. El estudio de observación se completa cuando se puede tomar una decisión sobre la dosis inicial para el estudio principal, o si se observa una muerte con la dosis fija más baja. El nivel de dosis inicial se selecciona como la dosis que se espera que produzca algunos signos de toxicidad sin causar efectos tóxicos graves ni mortalidad. La dosis inicial para el estudio de observación se selecciona entre los niveles de dosis fijas de 5, 50, 300 y 2.000 mg/kg como una dosis que se espera que produzca una toxicidad evidente basada en evidencia de datos in vivo e in vitro de la sustancia química o sustancias químicas estructuralmente relacionadas. En ausencia de dicha información, la dosis inicial será de 300 mg/kg. Excepcionalmente, y sólo cuando lo justifiquen necesidades reglamentarias específicas, podrá considerarse el uso de un nivel de dosis fija superior adicional de 5.000 mg/kg.
En el estudio principal, se dosifica a grupos de 5 animales mediante un procedimiento gradual utilizando dosis fijas de 5, 50, 300 y 2.000 mg/kg (excepcionalmente se puede considerar una dosis fija adicional de 5.000 mg/kg). El nivel de dosis inicial se selecciona sobre la base del estudio de observación. Dependiendo de la presencia o ausencia de signos de toxicidad o mortalidad de una dosis, se pueden administrar dosis fijas más altas o más bajas a otros grupos de animales. El procedimiento de prueba continúa hasta que se asigna la clase de clasificación de peligro apropiada, hasta que se identifica la dosis que causa toxicidad evidente o no más de una muerte, o cuando no se observan efectos con la dosis más alta o cuando ocurren muertes con la dosis más baja.
Además, la guía incluye la opción de realizar una prueba límite cuando es probable que el material de prueba no sea tóxico. Para esta prueba, se realizará un estudio de observación con un animal y una dosis inicial de 2.000 mg/kg (o excepcionalmente 5.000 mg/kg), seguido de un estudio principal con otros cuatro animales.
Los animales de prueba deben permanecer en observación durante al menos 14 días. Debe realizarse la determinación del peso corporal y la observación de signos clínicos indicativos de toxicidad. Todos los animales de prueba deben someterse a una necropsia macroscópica para evaluar los cambios patológicos macroscópicos. Además, se puede realizar un examen microscópico de órganos que muestren evidencia de patología macroscópica.
Con respecto a la formulación del preparado dosificado, se recomienda el uso de una solución/suspensión/emulsión acuosa siempre que sea posible, seguida en orden de preferencia de una solución/suspensión/emulsión en aceite (por ejemplo, aceite de maíz) y luego posiblemente una solución. en otros solventes. En el caso de solventes distintos al agua se deberá realizar un control y por tanto la prueba conllevará un coste adicional.