Endotoxinas en guantes médicos de un solo uso (EN 455-3: 2023). Detección cuantitativa de endotoxinas (European Pharmacopoeia 2.6.14: Método E –Chromogenic end-point method); LAL (Limulus Amebocyte Lysate). Prueba cromogénica.
Prueba con el certificado de Buenas Prácticas de Laboratorio (BPLs).
La prueba LAL (Limulus Amebocyte Lysate) cromogénica, se utiliza para detectar y cuantificar endotoxinas asociadas con bacterias gramnegativas, pero no detecta pirógenos relacionados con sustancias químicas. En la prueba, se utiliza un sustrato sintético equivalente al lisado de los amebocitos del cangrejo Limulus polyphemus, y se considera la más conveniente por: a) su sensibilidad elevada; b) los resultados de la prueba son lineales con la concentración de endotoxina; c) esta prueba está reconocida por la FDA, y se recomienda para garantizar que los productos analizados no contienen endotoxinas (sustancias pirogénicas); d) en esta prueba, se utiliza un sustrato sintético unido a un cromógeno que facilita la lectura y cuantificación de la reacción; e) la utilización de cinco estándares por duplicado permite elaborar una recta patrón para cada ensayo, para cuantificar la cantidad de endotoxina presente en la muestra analizada.
Según la norma EN 455-3, el número mínimo de guantes que se recomienda probar es dos pares de guantes para un lote inferior a treinta, tres pares de guantes para un lote de treinta a cien y el 3 % de un lote superior a cien, hasta un máximo de diez pares de guantes por lote.
Para la prueba, se extrae la superficie exterior de los pares de guantes con agua libre de endotoxinas durante 40 min a 60 min a una temperatura entre 37ºC y 40ºC, asegurando que todas las superficies entren en contacto con el medio de extracción. Finalmente, el extracto se centrifuga para eliminar las partículas, se decanta y se analiza inmediatamente para detectar endotoxinas.
Los resultados se expresan en unidades de endotoxinas por par de guantes. Si los guantes estériles deben etiquetarse como bajos en endotoxinas, el contenido de endotoxinas no debe exceder el límite de 20 unidades de endotoxina por par de guantes.
En nuestro laboratorio, el límite de detección de la técnica es de 0,03 UE/mL, por lo que, para concentraciones inferiores a este valor, únicamente se podrá informar el resultado como < 0,03 UE/mL de extracto.