Lactobacillus rhamnosus en muestras clínicas y preparados probióticos: Cultivo cualitativo y cuantitativo; Identificación molecular (PCR y secuenciación).
Información 10-01-2021.
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO), un probiótico es un microorganismo vivo que otorga beneficios a la salud de su hospedador, siempre y cuando sea administrado en las cantidades adecuadas y cumpla con los requisitos establecidos por la OMS y la FAO. El término probiótico fue utilizado por primera vez en 1965 por Daniel M. Lilly y Rosalie H. Stillwell, aunque su concepto fue acuñado por Elie Metchikof (Rusia, 1908), que postulaba que la longevidad de los pastores búlgaros podía deberse a la ingesta de leche fermentada y sus productos, afirmando que, eran ricos en bacilos que influían en la microbiota intestinal autóctona equilibrándola de manera que disminuía el efecto nocivo de otras bacterias.
Lactobacillus rhamnosus es una bacteria ácido láctica, grampositiva, no esporulada y anaerobia de la familia Lactobacillaceae. Fue considerada una subespecie de L. casei pero estudios posteriores demostraron que L. rhamnosus era una especie distinta capaz de utilizar la ramnosa como fuente de carbono. Otras evidencias demuestran que es la única bacteria ácido láctica con actividad α-quimotripsina y β-glucuronidasa. Se considera que posee efectos beneficiosos, que carece de efectos perniciosos, incluso en pacientes inmunodeprimidos.
La cepa de L. rhamnosus GG (LGG: cepa Gorbach-Goldin de Lactobacillus rhamnosus) es la más estudiada y más empleada como probiótico. Fue aislada del tracto intestinal de un individuo sano a principios de la década de 1980, registrada y patentada por la American Type Culture Collection (ATCC) como L. acidophilus GG (ATCC 53103). La patente de LGG indica que tiene capacidad para sobrevivir al pH del ácido gástrico y proliferar en presencia de bilis. Además, tiene gran capacidad para adherirse a las células epiteliales intestinales, y es productora de ácido láctico.
Existen muchas evidencias e investigaciones que avalan el uso de LGG como probiótico beneficioso para la salud humana. LGG es capaz de producir una película con factores solubles que protegen la mucosa intestinal, disminuye la muerte celular de la superficie intestinal y la protegen. Además, LGG posee una proteína inhibidora de algunos patógenos, capaz de reducir la expresión de varios marcadores de activación e inflamación en los monocitos promoviendo la respuesta inmunitaria, así como también, puede aumentar la producción de interleucinas 10 y 12 y factor de necrosis tumoral-α (TNF- α) en macrófagos.
Su uso es indicado en:
Diarrea aguda y gastroenteritis.
Diarrea asociada a antibióticos.
Diarrea del viajero.
Diarreas en niños que asisten a guarderías.
Prevención de la diarrea nosocomial.
Trastornos gastrointestinales que cursan con dolor abdominal.
Tratamiento coadyuvante de la erradicación de Helicobacter pylori.
Su uso evidencia los siguientes beneficios:
Disminución del número de deposiciones al segundo día de tratamiento.
Acortar la duración de la diarrea.
Reducción del porcentaje de diarreas que se prolongan durante más de 4 días.
Existen a la venta cápsulas probióticas de Lactobacillus rhamnosus GG que contienen 1010 bacterias/100 mg.
Para su aislamiento y posterior identificación de la cepa de L. rhamnosus, se puede utilizar un medio de cultivo selectivo específico, en agar MRS (de Man, Rogosa, Shape) modificado sustituyendo la glucosa por ramnosa para favorecer el crecimiento de L. rhamnosus, mientras que no lo hacen la mayoría de otras especies de Lactobacillus del tracto gastrointestinal. Su identificación puede realizarse mediante pruebas metabólicas convencionales o simplificadas (API). La identificación más óptima actualmente se realiza por métodos moleculares utilizando cebadores (primers) específicos de Lactobacillus del gen ribosomal 16S rARN o de la región intergénica 16S-23S, para posteriormente realizar su secuenciación y análisis de secuencias.
Pruebas realizadas en IVAMI:
- Aislamiento y cultivo cuantitativo de L. rhamnosus en medio selectivo y diferencial MRS modificado.
- Detección molecular (PCR) cualitativa.
- Identificación de colonias aisladas mediante métodos moleculares (PCR y secuenciación).