Virus de la tristeza de los cítricos (Citrus Tristeza virus –CTV-): Detección molecular por RT-PCR. 

Información 07-04-16.

El virus de la tristeza de los cítricos (Citrus Tristeza virus –CTV-) es una especie de virus del género Closterovirus (familia Closteroviridae), causante de una enfermedad importante económicamente, que afecta a este tipo de árboles (cítricos) en todo el mundo donde existen cultivos de cítricos. El nombre del virus fue dado en varios países de Sudamérica por las manifestaciones que presenta el árbol afectado.

CTV es un virus alargado, delgado y flexible de unos 2.000 nm de largo y 12 nm de diámetro, que posee un genoma de ARN monocatenario positivo  (+ssRNA) con una cápside formada por dos tipos de proteínas, una proteína mayor de capside (CP: Capsid protein) de 25 kDa y proteína menor CP. La proteína principal de 25 kDa se ha utilizado como elemento para el desarrollo de varios métodos de diagnóstico (ELISA, hibridación, RT-PCR, Real-time RT-PCR, etc.,). Su genoma de ARN monocatenario (ss), es de los más largos conocidos, con 12 regiones de lectura, que le permite codificar al menos 17 proteínas.  Además posee dos regiones sin traslación (UTRs 3´ y 5´: untranslated regions).

Este virus tiene una distribución mundial e infecta a muchas especies de cítricos: Citrus aurantium y cualquier especie infectada injertada en pies de naranjos agrios (Citrus aurantium) como Citrus sinensis, Citrus aurantifolia, Citrus reticulata, Citrus paradisi, …).

El virus se transmite por insectos vectores (principalmente los pulgones) que penetran el floema para extraer la sabia. Los principales pulgones transmisores son los pulgones marrones de los cítricos (Toxoptera citricida), que son más restrictivos en las especies de plantas que afectan, y se convierten en formas aladas para colonizar los brotes nuevos. Otros pulgones que pueden transmitir son Aphis gossypii (pulgón de melones),  Toxoptera aurantii (pulgón negro de los cítricos) y Aphis spiraecola. Los pulgones, para infestarse, requieren al menos 30 a 60 minutos de alimentación para adquirir el virus y permanecen infestados al menos 24 horas. También puede transmitirse con los esquejes utilizados para injertar, o con los utensilios utilizados para poda.

Los árboles afectados presentan una sintomatología muy variable según la especie de la planta, la virulencia de una cepa de virus y las condiciones ambientales. Los tres síntomas principales son: decaimiento rápido, en unos días, o lento a lo largo de meses o años después de la aparición de los primeros síntomas (hojas cloróticas y afectación general regresiva), picaduras en el tallo y amarilleo de los plantones. El decaimiento se observa en naranjos dulces, mandarinos y pomelos cuando se injertan en pies infectados. Los tallos presentan picaduras que dan lugar a pérdida de vigor del árbol y de producción de frutos, hecho típico cuando se infectan con las cepas más virulentas del virus. El amarilleo de los plantones, acompañado de regresión del crecimiento ocurre preferentemente en naranjos y limoneros.       

Según los síntomas provocados en los pies y en los vástagos de los cítricos, se han diferenciado 5 grupos principales de cepas de virus de la tristeza de los cítricos: cepa leve (M: Mild); cepa de aclaramiento venoso de lima mexicana; cepa de amarilleo de plantones (SY: Seeding Yellow) de naranjos, limoneros y pomelos; cepas de decaimiento rápido (QD: Quick Declaine); y cepas de picadura de tallos de pomelos y naranjos dulces (SP-G: Stem pitting on grapefruit-G y SP-O: Stem Pitting on sweet orange).

El método clásico de diagnóstico era injertar un pie de lima (Citrus aurantifolia) con tejidos de la planta enferma, que provoca la afectación de la planta injertada afectándose las hojas que mostrarán una vascularización que se taponará, se harán cloróticas y ahuecadas. Otra forma de detectarlo es mediante métodos de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) para detectar los antígenos de virus, o métodos moleculares para detectar el genoma del virus.

Pruebas realizadas en el IVAMI 

  • Detección e identificación molecular, mediante doble RT-PCR (nested Reverse Transcriptase Polymerase chain reaction), corroborado por secuenciación. 

Muestras recomendadas: 

  • Hojas de brotes de cítricos.

Envío de muestras:

  • Hojas introducidas en envase de plástico, y a ser posibles refrigeradas (contenedor de poliestireno –corcho blanco-, con pack –frigolines- congelados).

Entrega de resultados:

  • Métodos moleculares: 48 a 72 horas con identificación por secuenciación. 

Coste de la prueba:

  • Detección e identificación molecular, mediante doble RT-PCR (nested Reverse Transcriptase Polymerase chain reaction), corroborado por secuenciación.
    • Para muestras aisladas de un árbol
    • Para muestras de varios árboles
  • Consultar a ivami@ivami.com